导　　师： 雷红涛;沈兴

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 微囊藻毒素（Microcystin,MCs）具有强烈的肝毒性,可以通过饮用水及在动植物中的积累接触人类,严重危害人类健康和生态安全。MCs家族庞大,仅目前报道出的结构类似物便有100多种,现有的免疫检测方法较难实现一次性检测出所有MCs残留,需要开发广谱性更佳的免疫检测方法。目前抗体与MCs的识别机制研究较少,尚难解答半抗原结构对抗体性能的影响及指导人工调控抗体广谱性能。实验室前期针对不同碳链长度的MCs共有结构半抗原（命名为LH和GAA）得到2株广谱性抗体。为了阐释抗体MCs广谱性识别机制,以期为抗体性能调控提供理论基础,本研究制备了高纯度的LH和GAA抗体Fab片段,并通过间接酶联免疫吸附法（icEnzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ic-ELISA）考察二者广谱特异性;运用蛋白质结晶方法,制备LH-Fab和GAA-Fab片段单体及其与代表性MCs复合物晶体,解析两株抗体与MCs的三维立体结构,并探讨影响MCs抗体广谱性的因素,取得如下主要结果:（1）建立了LH和GAA单克隆抗体酶解与纯化方法。采用木瓜蛋白酶对LH和GAA单克隆抗体进行酶解,在纯化酶解液的过程中,发现LH-Fab与凝胶过滤层析填料存在非特异性结合。利用此现象建立了LH-Fab利用凝胶过滤层析高效1步纯化方法。结合不同缓冲液p H与离子强度下LH-Fab在柱中的保留行为及其性质分析LHFab与凝胶过滤层析填料的结合机制,LH-Fab结合腔表面的强疏水性可能是引起二者结合的原因。此外建立了GAA-Fab利用Protein G和凝胶过滤层析2步纯化方法。获得的Fab片段纯度分别为94.5%,91%,回收率分别为51%,37%。（2）评价了LH和GAA抗体Fab片段的活性与广谱特异性。结果表明Fab片段相较于亲本单克隆抗体对MCs的灵敏度下降了约2-9倍,但二者均可以识别交叉反应率在36%以上的8种MCs及NOD-R,保持了较好的广谱特异性。LH-Fab对MCs灵敏度仍然高于GAA-Fab�

关 键 词： 微囊藻毒素 广谱性 抗体 晶体

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