导　　师： 方唯意

学科专业： J0214

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 背景:结肠癌是常见的恶性肿瘤之一,其发病率呈逐年升高的趋势,目前对结肠癌具体发病机制仍有很多尚待明确的地方。microRNA-374a(miR-374a)在不同肿瘤中发挥不同的作用,如在乳腺癌中miR-374a可促进EMT的发生,在胃癌中促进细胞增殖,在鼻咽癌中却可抑制细胞增殖、转移,增加细胞对顺铂的敏感性,而miR-374a在结肠癌中的作用有待我们去研究。目的:1.体内外功能实验研究miR-374a在结肠癌中的作用;2.探究miR-374a在结肠癌中发挥作用的机制;3.找到miR-374a在结肠癌中作用的靶基因及miR-374a如何通过靶基因调控相关通路;4.分析miR-374a和靶基因在结肠癌组织中表达的相关性及对预后的影响。方法:1.体内外功能实验研究miR-374a在结肠癌中的作用(1)在HCT116和SW620中构建稳定过表达miR-374a的细胞株;(2)体外实验验证miR-374a对细胞增殖、侵袭和迁移的影响;(3)裸鼠皮下成瘤和肝包膜转移模型验证miR-374a对细胞增殖和肝内转移能力的作用,并用免疫组化检测肝内肿瘤的EMT相关因子;(4)转染miR-374a inhibitors进行功能回复实验。2.探究miR-374a在结肠癌中发挥作用的机制:Western Blot检测增殖和EMT相关蛋白表达改变并找到相关通路。3.找到miR-374a在结肠癌中作用的靶基因及miR-374a如何通过靶基因调控相关通路(1)生物学软件预测miR-374a的靶基因并进行双荧光素酶报告验证;(2)Western Blot检测干扰靶基因后周期、EMT蛋白表达及相关通路的改变,功能实验检测干扰靶基因对细胞功能的影响。(3)Western Blot检测重新表达靶基因后周期、EMT蛋白表达及相关通路的改变,功能实验检测重新表达靶基因对细胞功能的影响。4.分析miR-374a和靶基因在结肠癌组织中表达的相关性及对预后的影响(1)免疫组化观察miR-374a和靶基因在结肠癌组织表达定位和表达量差异;(2)结合miR-374a和靶基因的表达分析两者相关性及对预后的影响。结果:1.miR-374a在体内外均抑制结肠癌细胞增殖、侵袭、迁移和肝内转移能力;2.miR-374a抑制PI3K/AKT通路及下游周期、EMT相关因子;3.miR-374a通过靶向CCND1来抑制PI3K/AKT通路;4.在结肠癌组织中,miR-374a与CCND1表达呈负相关,且miR-374a高表达、CCND1低表达的患者预后最好。结论:miR-374a在结肠癌中发挥一个潜在的抑癌基因的作用,它可通过靶向CCND1使PI3K/AKT通路失活,从而抑制结肠癌细胞的增殖、侵袭和迁移。更多还原

关 键 词： miR-374a [8254065]CCND1 [7622797]PI3K/AKT通路 增殖 [8402960]EMT

分 类 号： [R735.35]

领　　域： []