导　　师： 王蔼明

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 目的:本研究检测miR-575在稽留流产患者中的表达及临床意义,分析其对人绒毛膜细胞凋亡的影响及作用机制,为临床上预防和治疗稽留流产提供可靠依据。方法:(1)本研究选取2015年3月～2015年10月在我院妇产科门诊就诊的孕7周稽留流产的妇女30例为流产组,同期健康妊娠的女性30例为对照组,采集上述两组妇女的绒毛组织,荧光定量PCR法检测miR-575的表达,TUNEL法检测细胞的凋亡率,分析miR-575与组织细胞凋亡的相关性。(2)给JEG-3(人绒毛滋养细胞)转染 miR-575 scramble、inhibitor 和 mimic,将 JEG-3 分为 control 组、miR-575 scramble 组、miR-575inhibitor 组和 miR-575 mimic组。检测上述各组细胞miR-575的表达;MTT法检测增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡率;荧光定量PCR法和westernblot法检测Bcl-2、Bax、p53、VEGF、Ang-2mRNA和蛋白的表达;(3)生物信息学软件预测miR-575的靶基因,构建含有荧光素酶报告基因的SOD2 3’ UTR WT和SOD2 3’ UTR Mut质粒,并与miR-575共转染JEG-3细胞,检测荧光素酶的表达量。荧光定量PCR和westernblot法检测 SOD2mmRNA 和蛋白在 control 组、miR-575scramble 组、miR-575 inhibitor组和miR-575 mimic组的表达。将pc-SOD2质粒转染JEG-3细胞,检测control组和pc-SOD2组SOD2mRNA和蛋白的表达;将JEG-3细胞分为control组,inhibitor 组和 miR-575inhibitor+pc-SOD2 组,检测各组 Ang-2、VEGF mRNA 和蛋白的表达,流式细胞术检测凋亡率。结果:(1)稽留流产组绒毛组织中miR-575的表达量高于正常对照组(P=0.033);绒毛细胞的凋亡率明显高于正常对照组(P=0.008)。稽留流产患者绒毛组织细胞的凋亡率与miR-575的表达呈正相关(r=0.419,P=0.001);(2)与 miR-575scramble 组相比,miR-575inhibitor 组miR-575表达量明显减少(t=3.217,P=0.044),细胞的凋亡率明显降低(t=3.566,P=0.042);而 miR-575mimic 组 miR-575 表达量显著增高(t=4.773,P=0.007),细胞凋亡率显著增高(t=3.859,P0.023)。与miR-575scramble组相比,miR-575inhibitor组细胞在48、72、96h时的增殖率明显增高(P>0.05),而miR-575mimic组细胞的增值率明显降低(P>0.05)。与miR-575scramble组相比,miR-575inhibitor 组 Bcl-2、Ang-2 和 VEGFmRNA 和蛋白的表达量明显增高,Bax、p53mRNA和蛋白的表达量明显减少;而miR-575mimic组Bcl-2、Ang-2和VEGF mRNA和蛋白的表达量明显减少,Bax、p53mRNA的表达量明显增高(P<0.05)。(3)SOD2被预测为mmiR-575的靶基因。与正常对照组相比,稽留流产组患者绒毛组织中 SOD2mRNA(t=3.122,P=0.048)和蛋白(t=3.245,P=0.046)的表达量均明显减少。miR-575inhibitor+SOD2 3’ UTR WT组荧光素酶的表达量明显低于miR-control+SOD2 3’ UTR WT 组(t=4.618,P=0.005),miR-575 inhibitor+SOD23’ UTR Mut组荧光素酶的表达量与mmiR-control+SOD2 3’ UTR Mut组无统计学差异(t=0.245,T=0.911)。与 control 组相比,pc-SOD2 组 SOD2mRNA(t=0.349,P=0.044)和蛋白(t=0.388,P=0.040)的表达量明显增高。与Scramble组相比,mimic组SOD2 mRNA和蛋白的表达量明显降低(P<0.01),inhibitor组则明显增高(P<0.01)。与 control 组相比,inhibitor 组 Ang-2、VEGFmRNA 和蛋白的表达量均明显增高(P<0.05),细胞凋亡率明显减少(P<0.01);inhibitor+pc-SOD2 组 Ang-2、VEGFmRNA 和蛋白的表达量则明显减少(P<0.05),细胞凋亡率则无统计学差异(P>0.05)。结论:miR-575通过靶向抑制SOD2的表达,进而降低Ang-2的表达促进绒毛滋养细胞凋亡,通过抑制VEGF的表达来抑制血管新生,最终引起稽留流产的发生。更多还原

关 键 词： [5663023]稽留流产 miR-575 [1707701]绒毛滋养细胞 [4085951]细胞凋亡 SOD2

分 类 号： [R714.21]

领　　域： []