导　　师： 王潮岗

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 深圳大学

摘　　要： 雨生红球藻(Haematococcus pluvialis)是一种单细胞真核绿藻,因在强光、高温、高盐和氮饥饿等胁迫环境下大量积累虾青素而备受关注。但是,由于虾青素合成涉及的基因数目多、调控网络复杂,至今仍不清楚其分子调控机制。与此同时,新一代高通量测序技术的出现大大促进了转录组学的研究,且不受物种和是否存在参考基因组的限制,能够快速对复杂的基因调控网络进行研究。为了弄清雨生红球藻虾青素合成调控的分子机制,本研究拟对胁迫早期的雨生红球藻192.80进行转录组测序,通过数据分析了解胁迫早期基因表达的特点,挖掘参与基因表达调控的关键基因,从而初步解析虾青素合成的调控网络。具体研究内容及结果如下:(1)通过半定量RT-PCR对胁迫早期的雨生红球藻虾青素合成关键酶基因HpCrtR-B和Hpbkt1进行转录分析。在45 mM NaAC和550μmol/m2/s光照强度下胁迫1.5h,已能够检测到HpCrtR-B和Hpbkt1基因的转录,4h后能观察到藻细胞开始积累虾青素,表明雨生红球藻虾青素合成的调控发生在胁迫早期;(2)为了获得高质量的雨生红球藻192.80的总RNA,实验中比较了不同培养基、藻细胞破壁方式、提取方法等因素,获得最优的总RNA提取方法:22℃白炽灯连续光照条件(25μmol/m2/s)下,于MIX培养基培养至对数中后期,离心收集藻细胞后采用改良Trizol法提取总RNA;(3)提取胁迫早期的雨生红球藻192.80总RNA进行转录组测序,经过测序、拼接、注释,共获得309962820条clean reads,83869个unigenes,unigene序列的平均长度747bp。对转录组进行GO、KOG、KEEG功能分类,发现大量unigenes与蛋白质转运、催化过程、转录和翻译有关,表明在胁迫早期雨生红球藻细胞内代谢旺盛,积极响应胁迫。通过与植物转录因子数据库比对获得476个转录因子,包括AP2/EREBP,bHLH,bZIP,C2H2,MYB和WRKY等几大类转录因子家族,显示在胁迫早期的雨生红�

关 键 词： 雨生红球藻 胁迫早期 转录组 表达调控 转录因子 基因

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