导　　师： 陈金顶

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 猪伪狂犬病（PR）是由伪狂犬病毒（PRV）引起的一种传染病，对世界养猪业造成严重危害。PRV属于疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科，该病毒可感染许多种类的哺乳动物，但猪是PRV的自然宿主和唯一潜在的携带者。　　流行性乙型脑炎（JE）是由流行性乙型脑炎病毒（JEV）引起的一种蚊媒性人畜共患传染病。感染JEV可引起怀孕母猪流产、产死胎或木乃伊胎，也可引起公猪的睾丸急性炎症反应或不育，严重影响养猪业的持续发展。　　本研究采用PCR方法扩增PRVgE基因的主要抗原表位区，构建原核表达质粒pET-gE，及利用本实验室保存的原核表达质粒pET-EIII，使两种重组质粒在大肠杆菌中进行高效表达。在SDS-PAGE分析基础上，结合ImageJ和Graphpad prism5.0软件的分析，对影响重组gE蛋白和重组EIII蛋白表达的诱导温度，诱导起始OD600，及IPTG浓度等因素进行了优化。确定重组gE蛋白最佳表达条件为：当菌体浓度达到1.2左右时，加入终浓度为1.5mM的IPTG，16℃恒温摇床175rpm过夜振荡培养。重组EIII蛋白最佳表达条件为：当菌体浓度达到1.6左右时，加入终浓度为1mM的IPTG，16℃恒温摇床175rpm过夜振荡培养。为得到高纯度的重组gE蛋白和重组EIII蛋白，对纯化条件进行了探索，确定重组gE蛋白结合液中咪唑浓度为100mM，蛋白洗脱液中咪唑浓度为500mM。确定重组EIII蛋白结合液中咪唑浓度为100mM，蛋白洗脱液中咪唑浓度为300mM。纯化后的蛋白分别进行Western blot鉴定，重组gE蛋白只与PRV标准阳性血清反应，重组EIII蛋白只与JEV标准阳性血清反应，与阴性血清均不发生反应。表明纯化的重组gE蛋白和重组EIII蛋白具有良好的特异性和反应原性。　　利用原核重组表达的gE蛋白作为包被抗原，并对各反应条件进行优化，建立了检测PRV血清抗体的间接ELISA方法。ELISA反应程序为：包被抗原�

关 键 词： 猪伪狂犬病毒 乙型脑炎病毒 疱疹病毒亚科 蛋白 抗原表位区 原核表达

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