导　　师： 丁彦青

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 目的:　　结直肠癌(CRC)是全球发病率第三的恶性肿瘤，肿瘤微环境在CRC的发生进展尤其是远处转移过程中发挥重要作用。作为微环境的重要组成，肠道微生物群的失衡在CRC的在启动及进展过程中的具体机制仍然未知。本项研究旨在探讨肠道固有菌群失衡与结直肠癌发生侵袭转移的关联，寻求肠道菌群与肿瘤以及肿瘤微环境间潜在作用机制。　　方法:　　1、四联抗生素处理构建小鼠菌群失衡模型，RT-PCR及mRNA芯片分析筛选菌群失衡相关的肿瘤转移关键蛋白;2、Western Blot和免疫组织化学染色检测人结直肠癌组织中该蛋白的表达，分析其表达与临床参数的关系;3、应用Transwell、划痕和细胞3D培养、CCK8、平板克隆、裸鼠皮下成瘤和尾静脉肺转移模型观察蛋白内源性改变对CRC细胞体内外增殖和转移能力的影响;4、应用巨噬细胞样细胞和小鼠腹腔原代巨噬细胞，与肿瘤细胞建立共培养体系;5、流式细胞术和免疫荧光检测加入外源性重组蛋白后巨噬细胞形态及分型改变，Western Blot及免疫荧光检测巨噬细胞信号通路的变化;6、免疫共沉淀（CO-IP）及免疫荧光共定位筛选分泌型蛋白与巨噬细胞的作用靶点;7、蛋白芯片检测上清中加入外源性重组蛋白后巨噬细胞分泌细胞因子的变化，以及相应细胞因子促进肿瘤细胞侵袭表型的信号通路。　　结果:　　人结直肠癌组织中脂多糖(LPS)表达增高（x2=32.091，P＜0.001），小鼠模型中大肠杆菌(E.coli)的失衡可以促进结直肠癌细胞原位增殖(t=1.538，P＜0.001)及肝转移能力(t=1.800，P＜0.001)。mRNA芯片分析及RT-PCR筛选分泌型蛋白组织蛋白酶K(CTSK)为菌群失衡和肿瘤转移相关蛋白。人结直肠癌中CTSK表达显著高于癌旁(x2=32.136，P＜0.001)，且与不良预后呈正相关。体内体外功能实验表明CTSK促进结肠癌细胞侵袭性表型并且可以被CTSK特

关 键 词： 结直肠癌 病理机制 肠道菌群失调 巨噬细胞 肿瘤微环境 细胞转移

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