导　　师： 吕海

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 目的：　　通过体外在骨肉瘤U2OS和Saos-2细胞及体内U2OS裸鼠荷瘤模型内进行实验，探讨双PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235能否调节骨肉瘤细胞对顺铂敏感性及相关机制。　　材料与方法：　　体外研究，首先采用CCK-8实验检测单独使用顺铂、单独使用NVP-BEZ235、顺铂联合NVP-BEZ235对骨肉瘤U2OS、Saos-2和MG-63细胞的半数抑制浓度，采用联合指数判断NVP-BEZ235与顺铂的在骨肉瘤U2OS、Saos-2和MG-63细胞内的协同效应;随后采用Western blot实验检测单独使用顺铂、单独使用NVP-BEZ235、顺铂联合NVP-BEZ235对骨肉瘤U2OS和Saos-2细胞细胞内PI3K-Akt-mTOR信号通路活性的影响;采用AnnexinⅤ-PI双染流式细胞仪、Western blot实验、SiRNA敲低自噬关键蛋白Atg-5表达的实验检测单独使用顺铂、单独使用NVP-BEZ235、顺铂联合NVP-BEZ235在骨肉瘤U2OS和Saos-2细胞内诱导的自噬的功能。　　体内研究，首先构建骨肉瘤U2OS裸鼠荷瘤模型，待肿瘤荷瘤成功后，通过灌胃或静脉注射方式给予裸鼠用药。用药过程及用药结束后，定期测量肿瘤大小、裸鼠体重。随后将裸鼠猝死，取肿瘤组织进行后续生化实验，检测肿瘤组织内增殖（通过Ki67染色）及凋亡（TUNEL染色）情况。　　结果：　　1.NVP-BEZ235在骨肉瘤U2OS、Saos-2和MG-63细胞内协同提高顺铂的抗增殖作用　　首先，采用CCK-8实验检测单独使用顺铂、单独使用NVP-BEZ235、顺铂联合NVP-BEZ235对骨肉瘤U2OS，Saos-2和MG-63增殖的影响。CCK-8实验结果显示骨肉瘤，Saos-2和MG-63细胞对不同浓度的NVP-BEZ235或/和顺铂具有不同反应。随后，采用CalcuSyn software软件分析两药联合指数是否为协同效果，结果显示NVP-BEZ235与顺铂的联合指数＜1，提示NVP-BEZ235协同提高顺铂对骨肉瘤U2OS，Saos-2和MG-63细胞的抗增殖作用。　　2.单独使用顺铂、单独使用NVP-BEZ235、顺铂联合NVP-BEZ235对骨肉瘤U2OS和Saos-2细胞�

关 键 词： 骨肉瘤 胞内磷脂酰肌醇激酶 雷帕霉素靶蛋白 抑制剂 顺铂敏感性 药理作用

领　　域： [] []