导　　师： 潘小平;曾涛

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 广州医科大学

摘　　要： 研究背景和目的：　　Dravet综合征（Dravet syndrome，DS），一种难治性癫痫性脑病，典型表现为一岁以内生长发育正常的患儿突然出现热性或无热惊厥，以全面性或单侧阵挛或强直阵挛发作起病，以后出现多种发作类型，如肌阵挛发作、不典型失神发作、复杂局灶性发作，影响精神运动发育，常规抗癫痫药物疗效不好，预后差。Dravet综合征的分子遗传学研究显示，70-80％的患者存在钠通道SCN1A基因突变。目前有DS小鼠模型、诱导性多能干细胞（Induced pluripotent stem cells，iPSc）模型证实钠通道SCN1A基因突变导致的钠通道功能受损是主要的致痫机制。但仍约有15%的Dravet综合征患者病因未明。　　研究发现，3′非翻译区（3′untranslated region，3′UTR）在mRNA的翻译、亚细胞定位以及稳定性中起重要作用。通过影响RNA结合蛋白、miRNA、非编码RNA等与mRNA3′UTR的结合，在转录后水平影响基因的表达。3′UTR的异常调控将导致蛋白表达异常，从而导致疾病发生。本课题组前期对DS患者进行钠通道SCN1A基因3′UTR突变筛查时发现一个新生突变（NM_006920c.*20 A＞G）。本研究拟对钠通道SCN1A基因3' UTR发现的新生突变进行功能分析，探索其在Dravet综合征中的致病机制。　　方法：　　一、钠通道SCN1A基因3′UTR突变位点的功能分析　　1、生物信息学分析：对变异位点采用Vector NTI软件对进行保守性分析，利用RNA structure5.3对SCN1A基因3′UTR突变位点进行RNA二级结构预测。　　2、构建双荧光素酶报告基因质粒，转染人畸胎瘤细胞（NT2细胞），检测荧光素酶活性。　　3、RNA电泳迁移阻滞实验（RNA Electrophoretic Mobility Shift Assay，RNA-EMSA）分析突变位点对非翻译区序列与细胞质蛋白结合的影响。　　4、荧光定量PCR检测突变位点对报告基因mRNA稳定性的影响。　　5、RNA-Protein Pull-Down

关 键 词： 综合征 钠离子通道 难治性癫痫性脑病 致痫机制

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