导　　师： 任涛

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 干扰素（interferon,IFN）是一种在特定诱导剂作用下，宿主细胞产生的一类具有广谱抗病毒、抗肿瘤及增强免疫功能的本质为分泌性多功能糖蛋白的细胞因子。1957年在英国科学家Isaacs研究病毒间相互作用时首次被发现，由病毒诱导产生，干扰病毒复制，限制病毒感染。根据干扰素来源，氨基酸序列及生物活性不同，干扰素被分为三大类，分别为Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型干扰素，Ⅲ型干扰素主要为λ干扰素。针对人λ干扰素的研究日益增多，但对鸡λ干扰素（Chicken interferon lambda，ChIFN-λ）的研究尚浅，对ChIFN-λ与其他干扰素的联合抗病毒作用机制尚不清楚，因此，本研究对ChIFN-λ进行原核表达，探究其生物学活性;同时，将ChIFN-λ与鸡α干扰素（Chicken interferon alpha，ChIFN-α）融合表达，探索ChIFN-λ与ChIFN-α（ChIFN-λ+α）的融合生物学活性。具体的研究有以下几个方面：　　根据GenBank提供的基因序列，分别设计出用以扩增ChIFN-λ与ChIFN-α的2对引物，最终，扩增出大小约为492 bp的去信号肽ChIFN-λ目的基因及大小约为489 bp的去信号肽ChIFN-α目的基因;使用重叠延伸PCR方法将ChIFN-λ与ChIFN-α基因融合，扩增出大小约为1023bp的ChIFN-λ+α目的基因。最后，利用pET-32a构建出ChIFN-λ与ChIFN-λ+α原核表达载体。　　将原核表达的重组质粒在BL21感受态细胞中诱导表达，结果显示，蛋白均以不溶性包涵体形式存在，经超声破碎、变性、复性和Ni柱纯化后，获得较高生物学活性的重组干扰素，经Western-Bolt鉴定ChIFN-λ蛋白大小约为37.2 kD、ChIFN-λ+α蛋白大小约为56.9 kD。　　在体外试验中，ChIFN-λ与ChIFN-λ+α在鸡胚成纤维细胞DF-1中均能良好的抑制水疱性口炎病毒（Vesicular Stomatitis Virus，VSV）与禽流感病毒(Avian influenza viruses，AIV);此外，ChIFN-λ+α能良好的抑制新城疫病毒（Newcastle disease virus，N

关 键 词： 肉鸡 干扰素 干扰素 免疫佐剂 生物学活性

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