导　　师： 袁子国;王晓虎

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： CIAPIN1（cytokine-induced apoptosis inhibitor 1）是近期已被证实的新近抗凋亡分子,广泛表达于机体各组织内,参与了肝脏组织造血、抗癌药物耐药性调控、癌症的发生发展及组织细胞抗凋亡的过程。已有研究表明,CIAPIN1广泛分布于中枢神经组织内,并可作为效应分子,参与了一些神经退行性疾病的发生发展。狂犬病病毒是一种高致死性的神经侵袭性病毒,能引起多种神经性功能障碍疾病,也能够诱导神经细胞的凋亡。课题组之前研究表明,当利用不同毒力强弱的狂犬病病毒感染小鼠后,鼠脑内的CIAPIN1产生了不同程度的差异性表达。因而,本实验旨在通过实现CIAPIN1的差异表达,观察对狂犬病病毒的增殖影响并为之后疫苗的生产提供参考。在本实验中,利用CRISPR-Cas9技术以及RNA干扰技术,以N2a细胞作为原型,构建了CIAPIN1过表达N2a细胞系N2a-CIAPIN1-OVER并沉默N2a细胞CIAPIN1。为检测并验证细胞模型CIAPIN1的表达是否达到预期,联用荧光定量PCR技术与Western Blotting技术进行确认并利用CCK8检测细胞模型的增殖能力变化以及利用流式细胞仪检测细胞模型的周期变化与早期凋亡情况,同时通过荧光定量PCR技术确认Caspase3、Bcl2、Bax、Caspase9几个主要凋亡基因的m RNA变化,最后分别在细胞模型上接种不同毒力的狂犬病毒毒株,增殖病毒后,测定病毒滴度与病毒N基因的表达情况以检测病毒增殖变化情况。结果显示:相较于对照组细胞,所构建的CIAPIN1过表达细胞系N2a-CIAPIN1-OVER与沉默细胞系中CIAPIN1的表达水平均产生了差异。其中在m RNA的表达水平上,过表达细胞组是对照细胞组的（274±3.06）%（P<0.05）,而沉默细胞组是对照细胞组的（35±2.18）%（P<0.05）。而Western Blotting的检测显示,过表达细胞组是对照细胞组的（210±1.94）%（P<0.05）,而沉默细胞组是对照细胞组的（18±1.14）%（P<0.05）,证明细胞模型构

关 键 词： 差异表达 细胞 模型构建 狂犬病毒 增殖研究

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