导　　师： 江正瑾

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 暨南大学

摘　　要： 天然产物作为一个巨大的资源宝库,已成为现代药物研发的重要源泉。但由于其高度的生物多样性及化学结构的复杂性,对活性化合物筛选技术提出了极大的挑战。随着药物筛选及发现技术的不断提升,已有部分天然产物被发现用于不同疾病的预防及治疗,但现有筛选技术大多存在周期长、耗时费力、自动化程度低等缺点,大大限制了当前天然产物的开发进度,并且在筛选过程中可能导致微量强活性成分的丢失。因此,本文将基于亲和色谱原理的亲和垂钓法及快速分离分析的高效液相-质谱联用技术相结合,以固定化酶技术制备的酶反应器作为亲和萃取柱与商业仪器部件进行高效整合,构建在线活性化合物垂钓平台,以期为天然产物中活性化合物的发现提供一种更简单、快速的筛选策略。第一章,介绍了天然产物在药物研发领域的重要性及近年来天然产物中活性化合物筛选的相关策略。此外,对固定化酶技术及乙酰胆碱酯酶的相关研究进行了系统介绍,在此基础上提出了本论文的研究思路与创新之处。第二章,以甲基丙烯酸缩水甘油酯(GMA)和乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为功能性单体,1,4-丁二醇(1,4-butanediol)、正丙醇(1-propanol)和水作为三元致孔剂,偶氮二异丁腈(AIBN)为引发剂,通过热引发的原位聚合反应得到poly(GMA-co-EDMA)整体基质材料作为载体用于固定乙酰胆碱酯酶,并对影响基质材料制备及酶固定化的相关因素进行了系统优化。后续对制备的最优乙酰胆碱酯酶反应器进行了一系列理化性质表征及性能评估,表明乙酰胆碱酯酶反应器制备成功且具备筛选酶抑制剂的能力。第三章,基于亲和色谱理论,将乙酰胆碱酯酶反应器作为亲和固相萃取柱与商业仪器部件进行重新整合,搭建AChE-ICER-LC-MS在线活性化合物垂钓平台。首先对酶反应器进行动力学参数考察,表明其对底物的酶解能力和对配体的亲和捕获能力;随之对系统重要影响参数进行调试,确立相关测试条件;最后采用标准混合物对在线垂钓平台进行验证,明确其在线垂钓天然产物中活性化合物的潜力。第四章,采用乙酰胆碱酯酶反应器对5种植物提取物进行整体酶抑制活性评价,筛选出乙酰胆碱酯酶抑制活性最强的延胡索提取物。后续将上述建立的AChE-ICER-LC-MS在线活性化合物垂钓平台应用于延胡索提取物中乙酰胆碱酯酶特异性配体的在线垂钓及鉴定;体外活性测试发现黄连碱、药根碱、非洲防己碱等展现出良好的乙酰胆碱酯酶抑制活性,进一步表明该在线垂钓平台应用于天然产物中活性化合物筛选的有效可靠性。第五章,对本论文的研究内容进行系统总结,并在此基础上对后续研究工作进行展望。更多还原

关 键 词： 天然产物 在线垂钓平台 [6166512]固定化酶 [1437709]整体柱 [975899]乙酰胆碱酯酶

分 类 号： [R965.1]

领　　域： []