导　　师： 张桂红

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 猪繁殖与呼吸综合征（PorcineReproductiveandRespiratorySyndrome,PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV）感染猪只引起的一种全世界养猪业内流行的病毒性传染病。该病以妊娠母猪流产和仔猪出现呼吸道疾病等典型的临床症状为特征，给养猪业带来了巨大的经济损失，严重制约着畜牧业的健康发展。　　目前PRRS的防控主要以疫苗免疫为主，尚未有针对该病的特效药。猪场使用的疫苗为商品化的PRRS弱毒苗和灭活苗，但无法安全高效地为猪群提供保护。弱毒苗存在着一定的安全隐患，灭活苗容易免疫失败，而且病毒基因组变异会给该疾病的防控带来极大的阻碍。有效的抗病毒药物是考虑防控该病的另一手段之一，研发出经济高效具有针对性药物是养猪业所期盼的目标。抗病毒蛋白N（CVN）是由蓝藻中提取的一种有抗病毒活性的蛋白，具有广谱抗病毒特性。CVN有着稳定的理化性质，对A型和B型流感病毒以及HIV等均具有良好的抗病毒效应，是一种新型的潜在抗病毒药物。　　本研究以Genebank中CVN基因序列（DQ668406.1）为基础，合成CVN基因，构建表达载体pMAL-c5x-CVN，通过优化IPTG诱导条件，表达出可溶性重组CVN蛋白。利用cck8试剂盒检测重组CVN对Marc-145细胞毒性，在安全浓度范围内进行抗PRRSV试验。在PRRSV感染Marc-145细胞的吸附、穿入和复制三个阶段进行试验，来探究CVN在体外Marc-145细胞上抗PRRSV的作用效果。各阶段的病毒TCID50测试结果和间接免疫荧光实验以及QPCR病毒量测定结果表明，CVN能够阻断PRRSV穿入细胞，而在病毒吸附细胞和在细胞内复制的阶段没有明显的效果。本研究为新型抗猪繁殖病毒与呼吸综合征病毒的药物研发提供理论基础。

关 键 词： 猪繁殖与呼吸综合征 蓝藻抗病毒蛋白 抗病毒效应 疫苗免疫

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