导　　师： 史伟

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 组成性和诱导的高水平自噬对维持足细胞正常生理功能及细胞稳态起到重要的作用。氨基酸饥饿是诱导自噬的重要方式，然而这一刺激对足细胞自噬的影响如何还缺乏研究。目前研究氨基酸饥饿的模型主要是去除全部氨基酸，还缺乏针对特定单一氨基酸缺失的研究。色氨酸是血清和培养足细胞的1640培养基中含量最低的氨基酸，吲哚胺2，3-双加氧酶(IDO)是调控其代谢的限速酶。我们推测，IDO介导的细胞局部“低色氨酸”微环境可能会促进自噬。本课题首先采用正常培养基、氨基酸缺乏及色氨酸缺乏培养基分别干预体外培养的足细胞，研究氨基酸饥饿对足细胞自噬的作用及机制。研究采用多种方法检测自噬轴，免疫印迹检测LC3Ⅱ、beclin1及p62的蛋白水平，使用RT-qPCR检测自噬相关分子转录，利用GFP-RFP-LC3腺病毒探针研究自噬轴，用透射电镜观察足细胞中的自噬体。我们发现氨基酸及色氨酸饥饿均以时间依赖的方式促进足细胞自噬轴活性。进一步观察发现，氨基酸饥饿通过抑制哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的活性及促进转录因子EB(TFEB)诱导自噬活化。进一步，我们观察了IDO/色氨酸信号通路和足细胞自噬的关系，发现生理条件下足细胞表达一定水平IDO;沉默IDO可降低自噬水平并介导足细胞损伤;晚期糖基化终产物和阿霉素可抑制足细胞IDO。和正常肾组织比较，微小病变性肾病的足细胞(损伤轻微)IDO显著升高，而局灶性节段性肾小球硬化足细胞(损伤严重)IDO水平明显降低。在脂多糖损伤足细胞的模型中，我们进一步观察到，脂多糖刺激介导的IDO抑制与自噬障碍及细胞损伤相关。本课题上述结果阐明了三个问题:1.在氨基酸饥饿诱导足细胞自噬的氨基酸组分中，色氨酸是一种重要成分。2.氨基酸饥饿早期通过磷酸化修饰，后期通过转录调控机制来�

关 键 词： 慢性肾脏病 足细胞自噬 氨基酸缺失 双加氧酶 吲哚胺 色氨酸