导　　师： 黄燕

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 广州中医药大学

摘　　要： 目的以缺血性中风阴类证、阳类证患者、非中风受试者作为研究对象,筛选出与阴类证、阳类证相关的差异lncRNA、miRNA、mRNA,探讨差异lncRNA、miRNA在阴类证、阳类证中可能作用机制。方法使用lncRNA/mRNA芯片、miRNA芯片技术,分别检测10例缺血性中风阴类证、10例阳类证患者、10例非中风受试者血清中lncRNA、miRNA与mRNA表达情况,并将三组间差异表达谱联合分析,筛选出缺血性中风与对照、缺血性中风阴类证与阳类证之间的差异表达基因。对获得的差异基因进行聚类分析、反义lncRNA与mRNA共表达分析、GO和KEGG功能通路分析,获取基因间调控关系,并预测lncRNA的靶基因。同时对筛选出的部分lncRNA,纳入60名受试者,进行qRT-PCR验证。结果1.使用高通量测序技术及生物信息学分析方法,对缺血性中风阴类证、阳类证组、非中风组表达谱进行两两比较,最终获得1023个lncRNAs（371个上调,752个下调）,587个mRNAs,（288个上调,299个下调）,5个的miRNAs（上调4个,下调1个）在急性缺血性中风中差异表达。存在6对可能具有调控急性缺血性中风生物学机制的反义lncRNA与正义mRNA:ENST00000428573（上调）与SYT2（上调）、ENST00000494849（下调）与PRKAR2B（上调）、NR036505（下调）与IPPK（下调）、NR131907（上调）与BCL2L1（上调）、T071563（下调）与CACNA1C（下调）、uc.148+（下调）与LRBA（下调）。分层聚类分析能区分lncRNA、mRNA在缺血性中风与非中风组的表达差异。qRT-PCR结果显示,T029143在脑梗死组中表达上调,ENST00000530525、T131416、T013651在脑梗死组中表达下调,且在脑梗死组与对照组之间有明显差异（P<0.05）。生物信息学富集结果提示,急性缺血性中风差异表达的mRNA主要与氧气运输、白细胞在炎症反应中的迁移、神经递质分泌的负调节、Toll样受体结合、组氨酸代谢过程、尿酸代谢过程等关系密切,涉及了多条涉及血管活性变化、血栓形成以及炎症反应的信号通路,包括毛细血管平滑肌收缩、RAS信号通路、趋化因子通路、磷脂酶D信号通路、血小板激活、白细胞内皮迁移等。2.通过高通量筛查与交联分析,筛选出了阳类证的257个差异lncRNAs（73个上调,154个下调）,54个差异mRNAs（21个上调,33个下调）,4个miRNAs（均上调）;阴类证的394个差异lncRNAs（283个上调,111个下调）,206个差异mRNAs（177个上调,29个下调）。聚类分析结果显示,差异的lncRNA、miRNA和mRNA表达谱均可较好的区分阴类证与阳类证样本,表明lncRNAs、mRNAs、miRNAs在急性缺血性中风阴类证、阳类证之间有差异性的表达。qRT-PCR结果显示,ENST00000527450、T131416在阳类证中表达上调,且在阴类证与阳类证间有明显差异（P<0.05）。在阳类证与阴类证差异表达的lncRNAs与mRNA中,存在77对可能具有调控关系的反义lncRNA与正义mRNA,可能参与证候的形成。GO与KEGG富集分析提示,阴类证、阳类证之间差异表达mRNA主要与血压调节、神经递质、内分泌激素调节、炎症等相关,如血压的正性/负性调节、Notch受体信号通路过程、氨基丁酸/-A受体复合体及其活性、肾上腺素能受体活性、花生四烯酸及其单氧酶/表氧化酶活性、白细胞介素1/1β的负性调节、呼吸爆发等相关。阳类证相关通路涉及血压调节,与既往研究中阳类证易感人群易患高血压特征关系密切。兴奋性的肾上腺素能受体通路与异质性的氨基丁酸相关通路,与阴阳类证患者不同症状表现关系密切。结论急性缺血中风阴类证、阳类证、非中风对照组之间均有较明显的转录组表达谱差异。急性缺血性中风差异表达的mRNA主要与氧气运输、白细胞在炎症反应中的迁移、神经递质分泌的负调节、Toll样受体结合、组氨酸代谢过程、尿酸代谢过程等关系密切,涉及了多条涉及血管活性变化、血栓形成以及炎症反应的信号通路。急性缺血中风阴类证、阳类证的发生发展与炎症反应、RAS系统、血小板活化、神经递质分泌等多个生物学过程和关键通路的联系。反义lncRNA与对应的正义mRNA在急性缺血中风致病过程可能起调控作用的。阴类证、阳类证之间的差异,主要体现在血压的正性/负性调节、抑制性神经递质与兴奋性神经递质和相关受体的差异调控,炎症与氧化应激等相关,为急性缺血中风阴阳类证辨证分治体系的物质基础和病理机制研究提供了一定的科学依据。更多还原

关 键 词： [5719054]急性缺血中风 阴阳类证 lncRNA [100052742]MRNA [8697896]MIRNA

分 类 号： [R255.2]

领　　域： []