导　　师： 周晓军

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 过去十年肺癌患者人数快速增长,2015年WHO更新了肺癌分类,强调肿瘤基因改变与组织学诊断同等重要,以驱动基因靶向治疗引领了精准医疗的潮流,必将带来越来越多的具有临床意义的潜在基因的分子检测技术发展。靶向药物治疗间变性淋巴瘤激酶(ALK)基因融合非小细胞肺癌(NSCLC)患者的疗效显著优于传统化疗,准确诊断ALK阳性NSCLC为精准治疗的关键,目前中国分子检测开展尚处于初期阶段,仅少数医院能完成分子诊断,ALK阳性NSCLC检测方法和诊断流程仍需要不断结合临床现状进一步优化。目的:本研究采用多种方法筛选ALK阳性NSCLC,分析其临床病理特征和EML4-ALK融合亚型的异质性,提出一套适合中国国情的诊断流程。方法:(1)收集566例NSCLC石蜡包埋组织,采用Ventana全自动免疫组化染色(Ventana-IHC)、荧光原位杂交(FISH)和序列特异性PCR技术(RT-PCR)方法检测ALK状态,分析Ventana-IHC染色的着色模式,总结ALK阳性NSCLC临床病理特征及治疗预后。(2)采用Ventana-IHC和手工IHC检测60例NSCLC,对比4种不同 ALK抗体D5F3(Ventana)、D5F3(Cell Signaling)、1A4/1H7(OriGene)、5A4(Abcam)联合手工IHC检测ALK染色情况。(3)采用RT-PCR和测序检测EML4-ALK的融合亚型,分析不同亚型的临床病理特征及临床意义。结果:(1)Ventana-IHC 筛查 ALK 阳性 NSCLC 的检出率为 6.7%(38/566),与FISH和PCR结果一致,36例Ventana-IHC异常染色模式经验证为ALK融合阴性。年龄≤60岁患者阳性率(10.6%)高于>60岁组(3.5%),有统计差异(P<0.05)。无性别差异,不吸烟者多见(78.9%),仅1例合并EGFR基因突变。组织形态上,81.6%为腺癌,其中实体型伴黏液产生多见(47.4%),非腺癌包括3例鳞癌、3例腺鳞癌及1例多形性癌。克唑替尼治疗缓解率为80%。(2)采用手工IHC方法,4 种抗体 D5F3(Ventana)、D5F3(Cell Signaling)、1A4/1H7、5A4 染色敏感性分别为 93.8%、84.4%、93.8%、56.3%,特异性均 100%,与 Ventana-IHC 染色结果一致性为96.7%、91.7%、96.7%、76.7%。手术切除大标本的ALK表达优于活检小标本。(3)存档石蜡包埋组织EML4-ALK融合亚型检出率为52.8%(19/36)。融合亚型V1(52.6%)最多见,其次V3(31.6%,包括1例V3a、1例V3b、4例V3a+V3b混合)和V2(15.8%)。不同融合亚型与患者临床特征(年龄、性别、吸烟、部位)、病理形态(腺癌亚型)以及总生存时间均无统计差异。结论:(1)ALK阳性NSCLC具有独特的临床表现和病理形态,Ventana-IHC可作为检测ALK阳性NSCLC首选方法,可优先检测潜在ALK基因高突变率的肺癌患者。(2)基于已普及且成熟的手工IHC,优选ALK抗体1A4/1H7,初筛ALK染色阳性病例再进一步验证,提出一套简便易行、更适合国内大规模筛查的诊断流程。(3)EM4-ALK的不同融合亚型与临床病理预后无关,尚需扩大样本例数,为EML4-ALK融合NSCLC的分子异质性研究提供实验数据和参考标准。更多还原

关 键 词： [6712601]非小细胞肺癌 [5837437]间变性淋巴瘤激酶 [4699026]免疫组化 抗体 筛查 融合亚型

分 类 号： [ZZ]