导 师: 蔡冬青
授予学位: 硕士
作 者: ();
机构地区: 暨南大学
摘 要: 目的:(1)对心尖切除10%后的成体热带爪蛙(Xenopus tropicalis)和白化非洲爪蛙(Xenopus laevie-albino)心脏进行研究。(2)构建Dendra2转基因热带爪蛙品系。方法:(1)建立热带爪蛙和白化非洲爪蛙心脏损伤与再生的模型,对爪蛙心尖部分进行切除手术后进行如下研究:(1)利用Hematoxylin-eosin染色和Masson’s Trichrome染色观察术后不同时间点心肌的再生情况;(2)利用PH3和α-SA免疫荧光染色技术,对心尖切除边缘区心肌的增殖能力进行研究;(3)利用透射电镜分析手术后2天、8天及正常心脏的血管、Telocytes及胶原的分布规律。(2)通过分子克隆的技术构建p BS-CMV-Dendra2和p BS-FlkDendra2表达载体,然后利用显微注射法建立Dendra2转基因热带爪蛙品系。结果:(1)成体热带爪蛙的心脏切除约10%的心尖组织后,大约有2/3的切除心脏能在30天内实现无瘢痕的完全修复与再生,重新长出外观完美的心尖区域,该部分心脏再生的心尖区域与周围组织没有粘连。另外1/3的心脏仅能实现外观近似完美的无瘢痕修复与再生,该部分再生的心尖区域与周边组织存在粘连。(1)H&E染色结果证明:术后0天,热带爪蛙心脏切除部位立刻产生少量的红细胞和炎症细胞。随后,红细胞和炎症细胞的数量增加,直到术后4天,红细胞数量开始减少,而炎症细胞的数量达到顶峰,但在8天时,红细胞和炎症细胞消失,并且发现在8天时伤口边缘有许多呈现不规则交叉条纹结构的新生心肌细胞。到术后16天时,大部分瘢痕组织消失。30天后(30天和60天),2/3的损伤心脏能恢复外观完美的形态,与正常心脏相似。而另外1/3的损伤心脏只能实现外观近似完美的再生。相同的是,术后70天时,绝大部分损伤的心脏都再生出完美的外观。(2)Masson’s Trichrome染色结果揭示:术后0至8天,胶原纤维数量逐渐增多,到了4-8天时纤维化强�