导　　师： 何伟

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 广州中医药大学

摘　　要： 目的:研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)在坏死股骨头内的表达水平以及TNF-α对SD大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法:1.从手术中获取股骨头坏死患者的股骨头,采用酶联免疫夹心法(ELISA法)测定股骨头内正常骨、硬化骨及坏死骨内TNF-α的含量,并分析三种骨内TNF-α含量的差异,及硬化骨内含量变化与患者年龄、性别、病因、证型、疼痛时间、ARCO分期和JIC分型之间的相关性。2.提取SD大鼠骨髓间充质干细胞,体外常规培养、传代至第4代进行实验。在不同浓度TNF-α干预下,成骨诱导培养基培养骨髓间充质干细胞的第14天、第21天分别进行ALP染色、ALP活性测定、茜素红染色和钙盐沉积定量测定,观察不同浓度TNF-α对SD大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响,根据染色结果,确定作用最明显的TNF-α浓度,并在此浓度干预骨髓间充质干细胞的第5天提取细胞RNA和蛋白,分别进行实时荧光定量PCR和Western-blot实验,分析TNF-α对成骨分化相关基因和蛋白的影响;干预的第5天提取基因组DNA,分析干预前后Runx2启动子区CpG岛DNA甲基化水平的变化;在干预的第5天,进行染色质免疫共沉淀实验,分析组蛋白H3K4和H3K27甲基化水平的变化。结果:1.共获取60例股骨头坏死患者的股骨头,男性45例,女性15例,平均年龄48.88±12.98岁;60例患者正常骨TNF-α含量90.66±40.29pg/ml,硬化骨TNF-α含量122.61±45.84pg/ml,坏死骨TNF-α含量65.79±34.79pg/ml;45例男性患者正常骨TNF-α含量88.74±36.89pg/ml,硬化骨TNF-α含量128.02±46.67pg/ml,坏死骨TNF-α含量65.91±35.55pg/ml,15例女性正常骨TNF-α含量96.42±50.16pg/ml,硬化骨TNF-α含量106.39±40.48pg/ml,坏死骨TNF-α含量65.43±39.53pg/ml;年龄段18-35岁14例,坏死骨TNF-α含量90.87±39.54pg/ml,硬化骨TNF-α含量104.93±35.11pg/ml,坏死骨TNF-α含量61.27±35.39pg/ml,年龄段36-50岁18例,正常骨TNF-α含量88.65±34.29pg/ml,硬化骨TNF-α含量126.44

关 键 词： 股骨头坏死 肿瘤坏死因子 骨髓间充质干细胞 甲基化 组蛋白甲基化 表观学修饰

领　　域： []