导　　师： 郭振飞

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 腺苷酸核糖基化作用因子（ADP-ribosylation factor，Arf）属于小G蛋白超家族中的Arf亚族，普遍存在于真核生物中，在内质网与高尔基体间的小泡运输、维持高尔基体和内质网的结构以及溶酶体/液泡运输途径中起重要作用。Arf和其它小G蛋白相似，具有很弱的本底水解GTP的GTPase活性，经GTPase激活蛋白（GTPase-activating protein，GAP）的作用，可以高效地水解GTP到GDP，变成非活性形式。Arfs的GTPase激活蛋白（ADP-ribosylation factor GTPase-activating proteins，ArfGAPs）可促进Arfs的GTPase水解，将这些Arf由与GTP结合的活性形式转化成与GDP结合的非活性形式，在调节Arfs的活性及功能中起关键作用。　　本研究从实验室截形苜蓿响应低温的表达谱中筛选了两个ArfGAP基因，MtArfGAP1（Mt1g069000）和 MtArfGAP2（Mt7g099830），其编码蛋白分别由481和443个氨基酸组成，都含有一个保守的属于CX2CX16CX2C类锌指结构域，即ArfGAP domain。MtArfGAP1和MtArfGAP2蛋白结构相似，同源性高达65%。与拟南芥中的15个ArfGAP类蛋白进行相似性比对发现MtArfGAP1和MtArfGAP2蛋白与AtAGD6和AtAGD7进化距离最近，属于Ⅱ类ArfGAP。将35S启动子驱动的MtArfGAP1-EGFP和 MtArfGAP2-EGFP载体转化水稻原生质体，利用激光共聚焦观察发现 MtArfGAP1和MtArfGAP2蛋白在细胞核中均有分布。构建PMtArfGAP1::GUS和PMtArfGAP2::GUS表达载体，利用农杆菌菌液侵染拟南芥，获得了PMtArfGAP1::GUS的转基因拟南芥，但未筛选到 PMtArfGAP2::GUS的拟南芥。通过 GUS（β-glucuronidase）组织表达检测发现MtArfGAP1主要在花和叶中表达。实时荧光定量PCR分析结果表明光照和低温对MtArfGAP1和MtArfGAP2表达都有影响，光照诱导MtArfGAP1和MtArfGAP2的表达，而低温则抑制两者的表达。　　分别构建MtArfGAP1和MtArfGAP2的过表达载体，并利用基因组编辑技术，在MtArfGAP1和MtArfGAP2的ORF5’区和功能结构域各�

关 键 词： 截形苜蓿 蛋白 蛋白 转基因技术

领　　域： []