导　　师： 蒋红霞

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 超广谱β-内酰胺酶（ESBL)，尤其是CTX-M亚型在中国乃至世界范围内的流行呈现逐年增长的趋势，CTX-M主要介导细菌对第三、四代头孢类药物耐药。在过去的报道当中，人们大多关注由质粒介导此类耐药酶基因的水平传播.在本文中，我们根据本试验室发现的携带blaCT X-M-27的P1-like噬菌体PJ46的全序列，设计P1-like噬菌体中稳定存在且较为保守的特征基因（repL)引物，通过PC R扩增，对携带blaCT X-M-27的大肠杆菌和沙门菌进行P1-like噬菌体的流行性调查，以期了解P1-like噬菌体介导的耐药基因blaCT X-M-27的流行情况。此外，对携带blaCT X-M-27的P1-like噬菌体及质粒进行了特征研究，以期从分子水平分析blaCTX-M-27的流行和传播机制，为减缓blaCT X-M-27基因流行和传播提供理论基础。　　本研究对2003年至2014年间广东、广西、湖南、湖北采集的携带blaCT X-M-27的动物源沙门菌（40株）和大肠杆菌（20株）进行药物敏感性试验，结果显示，菌株对β-内酰胺类药物具有较高的耐药率，且多药耐药现象严重。菌株对头孢噻肟、氨苄西林、卡那霉素、氟苯尼考的耐药率均为100%，对头孢曲松、恩诺沙星、阿米卡星、四环素及氯霉素的耐药率均达到90%。经接合转移和转化试验，共获得40株转化子及20株接合子，接合子及转化子均成功转移blaCT-M-27耐药基因。对接合子及转化子进行PCR扩增检测噬菌体标志基因repL，结果显示，36株沙门菌转化子检出该基因，而大肠杆菌接合子中未检出该噬菌体标志基因。对接合子及转化子进行S1-PFGE及blaCTX-M-27和repL基因探针Southern-blot杂交，结果显示，33株检出repL的沙门菌转化子，两种基因可以被杂交于同一位置，证明了由P1-like介导的b laCT X-M-27的传播。　　经PCR检测复制子类型，20株大肠杆菌质粒中，13株为 FIB型，1株为HI2型，2株为FIB型和HI2型复合

关 键 词： 噬菌体 大肠杆菌 流行性调查 特征分析 耐药基因 沙门菌

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