导　　师： 侯金林;王战会

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 急性乙型肝炎患者中HBV特异性CD4+及CD8+T细胞通过其表面的T细胞受体(TCR)识别多个病毒抗原表位，产生多克隆的强效免疫应答，控制HBV感染;而在慢性乙型肝炎(CHB)患者的HBV特异性T细胞功能耗竭。核苷（酸）类似物(NUC)抗病毒治疗降低病毒载量及HBV抗原水平，T细胞功能得到短暂性部分恢复。但研究方法局限于组织相容性抗原-肽染色、细胞因子检测等方法。而CHB患者其TCR基因表达变化与抗病毒治疗结局的关系仍未明确。　　研究目的：　　该研究采用无偏差的5'端cDNA末端快速扩增技术(RACE)扩增TCRβ链(TRB)片段以及高通量测序，深度分析发生乙肝e抗原(HBeAg)血清学转换与否的CHB患者在抗病毒治疗早期其外周血CD4+及CD8+T细胞TRB CDR3的差异;并分析TRB CDR3动态变化与治疗期间HBV DNA以及HBV抗原水平的相关关系。　　研究方法：　　1.研究对象　　所有研究对象来源于一项替比夫定治疗临床队列的22例HBeAg阳性CHB患者。收集治疗0、12、24、52、104周血清及外周抗凝血。根据治疗52周及104周的应答情况分为完全应答组(CR，n=10)及非完全应答组(NCR，n=12)。CR组定义为治疗52周及104周HBeAg发生血清学转换及HBV DNA水平＜300copies/mL;NCR组定义为治疗52周及104周HBeAg维持阳性及HBV DNA水平＞300copies/mL;2.分离治疗基线、12周、24周外周血单个核细胞，流式细胞仪分选CD4+及CD8+T细胞，提取总RNA;5'RACE技术及巢式PCR扩增TRB链基因全长;构建测序文库及Illumina Hiseq上机测序;3.测序数据处理及分析　　采用免疫组库分析软件MiXCR进行V、D、J基因片段比对，识别出有效TRB及CDR3序列。相同CDR3序列称为一种克隆型。根据两两时间点每种克隆型频率变化，分为消失、下降、持续、增生及新增5类克隆型。　　研究结果：　　1.CHB患者抗病毒治疗过程中外周血TRB文库多样性分析　　CR组在治疗过程�

关 键 词： 慢性乙型肝炎 免疫疗法 细胞受体 基因表达 抗病毒作用

领　　域： [] []