导　　师： 朱肖奇

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 背景:脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)是生产生活中时常发生的一种后果比较严重的损伤。随着工业时代的飞速发展,交通事故、运动损伤和高处坠落等导致SCI患者数量逐年上升,且多发生于青壮年人群中。脊髓损伤后,神经元不能再生,常常容易发生截瘫,治疗难效果不理想,至今人们没有找到好的方法去解决这一难题。一般临床上采取手术减压,结合药物治疗。药物治疗方面用甲强龙冲击疗法,但是治疗效果不理想。因此,我们一直在探索应用一些新的技术手段提高SCI的疗效,使得脊髓损伤后损伤的轴突能再生,重建脊髓功能,尽快将之应用于临床治疗中。近年来随着组织工程技术研究的兴起以及对SCI后的病理改变、机理认识不断深入的研究,科学家们提出采用细胞移植,另外结合基因工程技术,使得脊髓损伤的治疗成为崭新的有效的方法变得可能。目的:探讨联合用腺病毒转染目的基因Shootin1的骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的疗效,为进一步研究治疗脊髓损伤的方法作出有益的探索。方法:1.全骨髓贴壁培养法分离培养骨髓间充质干细胞,观察细胞形态,并进行流式细胞学鉴定。2.以腺病毒为载体,体外转染Shootin1进入BMSC,检测Shootin1蛋白的表达情况;3.在体外进行神经诱导分化,观察细胞是否向神经元样细胞分化;4.建立大鼠脊髓撞击损伤模型,在脊髓损伤后半小时内在原位分别注射移植Shootin1-BMSC和BMSC来进行脊髓损伤后修复治疗,每周对大鼠运动功能进行BBB评分,5周后处死大鼠,取脊髓标本进行冰冻切片,进行免疫荧光检测神经元相关标记蛋白。结果:1.同未转染Shootin1的骨髓间充质干细胞相比,携带Shootin1的慢病毒感染BMSCs能持续稳定高水平表达Shootin1蛋白;2.在体外经过神经诱导分化7天,Shootin1转染的BMSC与正常BMSC细胞形态上均发生了变化,我们通过IF检测神经前体细胞特异性标记Nestin和神经元特异性核蛋白NeuN的发现,Shootin1-BMSC和BMSC两组Nestin与NeuN蛋白的表达并无明显差异;3.骨髓间充质干细胞移植后,进行运动功能评分,发现细胞移植组与对照组相比,其运动功能恢复有明显的变化,并且Shootin1-BMSC移植组的BBB评分最高,但Shootin1-BMSC移植组与BMSC组的评分相比(P>0.05)没有统计学意义。结论:1.本实验证明了 BMSCs细胞移植可以有效地促进脊髓损伤后运动功能恢复;2.Shootin1蛋白可以促进脊髓损伤后损伤区域神经再生和功能恢复,但其作用较BMSCs直接移植组并不明显。更多还原

关 键 词： [5733162]脊髓损伤 [6146224]骨髓间充质干细胞 Shootin1 [1950945]神经再生

分 类 号： [R651.2]

领　　域： []