导　　师： 吴宝剑

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 暨南大学

摘　　要： 目的:　　生物碱是一类含氮有机化合物,其包含许多天然产物(如喜树碱、麻黄碱、乌头碱、士的宁)和合成药物(如普鲁卡因、三氟拉嗪、阿米替林).生物碱具有广泛的药理活性,如抗病毒、抗菌、抗癌、抗炎及抗抑郁活性.N-葡萄糖醛酸化代谢(NG代谢)是多种叔胺生物碱在人体内重要的代谢途径,可极大地影响叔胺生物碱在体内的浓度,从而改变其药效/毒性.然而,叔胺生物碱的NG代谢行为和规律尚不明确,其影响因素仍需阐明.本论文研究将评价葡萄糖醛酸转移酶(UGTs)在叔胺生物碱NG代谢中的作用,阐明外排转运体和核受体对NG代谢的调控效应及作用机制.具体研究目标如下:(1)建立NG代谢的体外评价体系,测定叔胺生物碱的NG代谢活性;(2)评价UGT1A4和UGT2B10在叔胺生物碱NG代谢中的作用,考察NG代谢的种属间差异;(3)明晰外排转运体对NG代谢产物的外排作用,考察其对NG代谢的调控效应;(4)明确调控NG代谢的关键核受体,阐明调控机制.　　方法:　　1.采用UGT1A4和UGT2B10特异性底物(三氟拉嗪、可替宁和阿米替林)建立NG代谢的体外代谢体系.考察缓冲盐种类、pH值、打孔剂、MgCl2浓度、UDPGA浓度和β-葡萄糖醛酸苷水解酶抑制剂对NG代谢的影响,优化体外代谢条件.在优化条件下测定叔胺生物碱的NG代谢活性,采用液相-质谱联用法对生成的N-葡萄糖醛酸苷进行鉴定.此外,采用UGT1A4和UGT2B10重组酶测定两者对叔胺生物碱的代谢活性.　　2.对六种生物碱(米氮平、米安色林、苯甲嗪、氯苯甲嗪、士的宁和马钱子碱)的NG代谢进行全面表征,包括单酶筛选、动力学测定、活性相关性分析、代谢抑制实验和种属代谢差异分析.明晰UGT1A4和UGT2B10对生物碱NG代谢的贡献程度.　　3.采用慢病毒转染法构建UGT2B10高表达HEK293细胞(简称为HEK2B10细胞).通过qPCR法、蛋白免疫印迹分析和活性检测对该细胞模型�

关 键 词： 叔胺生物碱 葡萄糖醛酸化代谢 外排转运体 核受体 调控效应

领　　域： [] []