导　　师： 陈晓阳

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 黄梁木（Neolamarckia cadamba）又名团花,是茜草科（Rubiaceae）团花属（Neolamarckia）多年生落叶乔木,因其树型通直优美、材质优良、活性代谢产物丰富,适用于园林绿化、工业用材和医药原料等,开发利用前景十分广阔。过去对黄梁木的研究主要集中在引种栽培、药效成分鉴定和药理学分析,而在分子设计育种和多抗新品种培育方向的研究几乎空白。转基因是研究植物功能基因的重要技术手段,也是加快新品种培育十分便捷的途径。然而,目前黄梁木还没建立起高效的再生体系和遗传转化体系。值得庆幸的是,植物组织培养技术和转基因技术已日趋成熟,为批量化生产性状优良的黄梁木种苗和开展分子育种提供了技术支撑。本研究对组织带内生菌的野生黄梁木茎段进行常规灭菌,同时配合使用细菌和真菌抗生素,开展内生菌的药敏性试验;另一方面,以黄梁木无菌苗叶片为外植体建立了黄梁木再生体系,并在此基础上借助高通量测序技术和生物信息学方法,系统研究黄梁木胚性愈伤组织形成的分子机制;此外,通过优化影响转化效率的各因素,建立了农杆菌介导的黄梁木遗传转化体系;最后构建cry1Ac-CBF1双价基因表达载体并转化黄梁木,获得了转基因植株。主要结果如下:1、黄梁木内生菌污染控制。以多年生黄梁木树上的嫩茎段为材料,分析不同类型抗生素及其浓度对黄梁木组培中内生菌的抑制效果。结果表明,黄梁木组培过程中的污染是由细菌和真菌共同导致的结果,联合使用细菌抗生素和真菌抗生素对内生菌抑制效果最好。外植体在300 mg/L硫酸链霉素和800 mg/L氟康唑抗生素的培养基中生长正常,且污染率低至30%。此外,抗生素对内生菌的抑制有一定的时效性,及时将茎段上萌发的嫩叶接种到诱导培养基上可以再生不定芽,不仅提高了增殖效率,还进一步防止内生菌的

关 键 词： 再生 遗传转化体系 胚性愈伤