导　　师： 王晓波

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 广东药科大学

摘　　要： 职业性六价铬[Cr(Ⅵ)]暴露主要来源于铬酸盐生产、电镀、铬铁生产和不锈钢焊接相关行业。Cr(Ⅵ)对人体危害严重,被IARC列为人类Ⅰ类致癌物,可诱导肺癌、鼻咽癌的发生。研究已显示Cr(Ⅵ)诱导人类皮肤细胞毒性、染色体畸变、DNA双链断裂等。叶酸在人体生化过程中,参与一碳单位的转移,为DNA甲基化提供甲基,在细胞内可以维持基因组的稳定,在合成、维持、修补DNA过程中发挥重要作用。本研究目的主要探讨Cr(Ⅵ)对HaCaT细胞损伤以及叶酸对Cr(Ⅵ)诱导HaCaT细胞损伤的作用,为进一步研究叶酸对Cr(Ⅵ)职业性接触人群的防护作用提供理论依据。研究内容包括:(1)MTT法检测不同浓度Cr(Ⅵ)及不同浓度叶酸对HaCaT细胞生存率的影响,获得IC50,并选取合适染毒浓度进行下一步实验。(2)SCGE/彗星实验检测Cr(Ⅵ)对HaCaT细胞DNA损伤情况,以及叶酸对Cr(Ⅵ)染毒HaCaT细胞DNA损伤的影响,采用尾长、尾矩、尾部DNA%评价DNA受损程度。(3)5-mC免疫荧光法检测不同剂量Cr(Ⅵ)作用于HaCaT细胞后,细胞内DNA甲基化水平的改变及叶酸在Cr(Ⅵ)所致的细胞DNA甲基化水平变化上的作用。(4)采用RT-PCR、蛋白免疫印迹法分别检测Cr(Ⅵ)作用于HaCaT细胞后细胞内hMLH1基因mRNA和hMLH1蛋白的表达水平变化以及叶酸对Cr(Ⅵ)致HaCaT细胞hMLH1基因和蛋白表达的影响作用。研究结果如下:(1)Cr(Ⅵ)染毒浓度升高,细胞生存率下降。当Cr(Ⅵ)染毒浓度为10.00μM及以上时,细胞生存率与对照组差异有统计学意义(P<0.05),IC 50为15.88μM。2.5-320.0n M的叶酸对细胞生存率无影响(P>0.05)。(2)非参数检验结果显示对照组与不同浓度Cr(Ⅵ)染毒组的DNA损伤指标(尾长、尾部DNA%、尾矩、Olive尾矩)差异有统计学意义(P<0.05);Cr(Ⅵ)浓度为10.00、20.00、40.00、80.00μM时,尾长、尾部DNA%、尾矩均比对照组高(P<0.05)。叶酸预处理组与正常对照组、Cr(Ⅵ)单独染毒组�

关 键 词： 叶酸 甲基化 损伤

领　　域： []