导　　师： 邓小娟

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 抗菌肽（Antibmicrobial peptides）是体液免疫中产生的效应分子，在昆虫的免疫防御中起重要作用。家蚕是一种重要的经济昆虫，也是鳞翅目昆虫的模式代表，其免疫机制的研究备受关注。根据抗菌肽的结构和功能特点，家蚕中的抗菌肽被分为7个家族，其中Cecropin、Attacin、Lebocin、Moricin、Enbocin和Gloverin6个家族抗菌肽的功能和活性已有报道，而 Defensin家族的两个抗菌肽成员 DefensinA和DefensinB的功能尚未得到鉴定，仍有待进一步研究。　　论文首先通过杆状病毒真核表达系统表达家蚕抗菌肽DefensinB，检测重组蛋白DefensinB的抑菌活性;其次，从不同家蚕品种扩增DefensinB的基因序列，分析品种间的序列差异，并进一步检测细菌和真菌诱导后不同品种中家蚕DefensinB基因的转录表达情况。研究获得以下主要结果：　　1、以家蚕幼虫脂肪体cDNA为模板，通过RT-PCR扩增得到C端带有His.tag的DefensinB编码序列，酶切连接到pFastBac1载体，成功构建pFastBac1-DefensinB重组载体，利用Bac-to-Bac系统转化至E. coli AcDH10Bac中，通过PCR检测筛选出重组Bacmid-DefensinB。转染Sf9细胞，得到P1代重组杆状病毒，经扩增繁殖得到P2代、P3代病毒。以P3代病毒感染无血清培养的Sf9细胞，培养7d后收集培养液上清和Sf9细胞，Western blot结果显示在培养基上清中和Sf9细胞内均存在DefensinB重组蛋白，通过Ni-IDA亲和层析柱纯化得到重组蛋白DefensinB。　　2、采用琼脂板孔穴扩散法和生长曲线法，体外检测重组蛋白DefensinB的抑菌活性，结果显示重组蛋白对金黄色葡萄球菌（S. aureus）和大肠杆菌（E. coli K12D31）没有抑菌活性，也没有检测到对粗糙脉孢菌（ Neurospora crassa）、立枯丝核菌（Rhizoctonia solani）和尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）等供试真菌的抑菌活性。　　3、以大造、琼山海南、932、秋丰、芙蓉、7532、

关 键 词： 家蚕 抗菌肽 抑菌活性 序列差异

领　　域： []