导　　师： 张世忠

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 脑胶质瘤发生、发展存在复杂调控机制，如何攻克胶质瘤始终是研究热点及难点。目前胶质母细胞瘤患者平均中位生存期只有12～18月，既往研究NF2基因与肿瘤发病过程关系密切，是一个重要肿瘤抑制因子，NF2基因表达产物merlin蛋白在肿瘤细胞调控过程作用关键。DNMT对NF2基因甲基化进行催化，异常DNMT表达与肿瘤发生紧密联系，而大量破坏DNA甲基化正是胶质瘤细胞迅速增殖的特性。已有大量研究发现不同miRNAs因子失调与肿瘤发病机制之间密切相关，但miRNAs和DNMT1之间调控机制及与胶质瘤凋亡、侵袭关系仍有待研究。　　目的和意义：　　本课题围绕miR-152-3p与DNMT1-NF2通路之间的调控机制，研究这条通路对胶质瘤发生、发展及凋亡等生物学行为的影响。通过检测miR-152-3p、DNMT1、NF2及其甲基化在胶质母细胞瘤组织和胶质瘤细胞表达，分析miR-152-3p、DNMT1、NF2三者与胶质瘤细胞凋亡、侵袭细胞学之间关系的实验，探讨miR-152-3p、DNMT1、NF2与胶质瘤发病机制之间关系，寻找调控胶质瘤细胞凋亡及侵袭新的环路。　　方法：　　本课题研究分两部分内容：第一章qRT-PCR和Western blot检测胶质母细胞瘤组织和胶质瘤细胞miR-152-3p、DNMT1、NF2表达;免疫组化检测正常人脑组织和胶质母细胞瘤组织中DNMT1、merlin蛋白表达;MSP和BSP检测胶质母细胞瘤组织和不同胶质瘤细胞系中NF2基因甲基化程度。第二章DNMT1基因siRNA重组质粒与NF2过表达载体构建;将敲减DNMT1基因表达质粒及NF2、miR-152-3p过表达载体转染体外培养U251胶质瘤细胞;qRT-PCR、Westrn blot、MSP和BSP检测转染后胶质瘤细胞miR-152-3p、DNMT1、NF2表达;CCK方法检测质粒转染后U251胶质瘤细胞增殖情况;免疫荧光实验对CCK结果进行验证;流式细胞学方法、EDU方法检测质粒转染后U251胶质瘤细胞凋亡情况;评估transwell侵袭实验转染后U251�

关 键 词： 脑胶质瘤 发病机制 小分子核糖核酸 基因 基因 细胞凋亡 细胞侵袭能力

领　　域： [] []