导　　师： 韩守威

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 广州中医药大学

摘　　要： 目的:澳洲茄边碱属于扶正抗癌方中龙葵的生物碱成分,文献报道扶正抗癌方治疗肺癌有良好的效果,随着相关研究的深入,对扶正抗癌方内的单味中药所含的单体成份的研究也逐渐开展。现有研究报道,龙葵以及澳洲茄边碱对于多种肿瘤均有较明显的抑制作用,但相关的作用机理报道较少。通过前期实验研究,我们发现澳洲茄边碱对肺癌细胞生长有良好的抑制作用。我们设置此课题,通过体内和体外实验进一步阐明澳洲茄边碱抑制非小细胞肺癌细胞生长可能的分子机制。方法:采用四甲基偶氮甲唑盐比色(MTT)方法检测澳洲茄边碱对肺癌细胞(A549、H1299、H1299、H1650、H1975)的生长的抑制作用,比较不同浓度澳洲茄边碱对肺癌A549、H1299细胞在24h,48h和72h的细胞活力的影响。采用流式细胞术(Flow Cytometry,FCM)检测澳洲茄边碱作用48h后对A549和H1299肺癌细胞周期的影响。利用蛋白质免疫印迹法(Western Blot,WB)检测澳洲茄边碱(6.0 μM)不同时间点对A549和H1299肺癌细胞Akt、ERK等激酶蛋白磷酸化的表达的影响。利用蛋白质免疫印迹法检测不同浓度梯度澳洲茄边碱作用于A549和H1299肺癌细胞24小时后SP1、EP4、NF-κ B、DNMT1、c-Jun等蛋白表达情况。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测澳洲茄边碱(6.0uM)对A549和H1299肺癌细胞EP4 mRNA表达水平的影响;采用双荧光素酶报告基因法检测澳洲茄边碱对A549和H1299肺癌细胞EP4启动子活性的影响;采用ERK抑制剂(PD98059),观察澳洲茄边碱通过p-ERK对DNMT1蛋白表达的影响。采用外源性过表达(质粒转染)技术研究澳洲茄边碱作用后,观察相关蛋白表达的相互影响。动物实验采用A549-Luc细胞接种裸鼠腋下形成移植瘤模型。采用随机数字法分组,分为:空白对照组、澳洲茄边碱低剂量组(4mg/kg)、澳洲茄边碱高剂量组(8mg/kg)。隔天一次腹腔注射给药,用药30天。采用小动物活体

关 键 词： 澳洲茄边碱 细胞生长 靶向治疗 信号通路 非小细胞肺癌

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