导　　师： 林宏生;郭国庆

授予学位： 博士

作　　者： ;

机构地区： 暨南大学

摘　　要： 目的:　　神经网络的建立需神经突起的生长发育提供物质基础,而神经突起的生长发育主要通过改变细胞骨架的运动进行调控,细胞骨架的运动主要依靠微管与微丝间的不断聚合和解聚,而微管与微丝间的互作机制仍未完全阐明.微管切割蛋白Spastin与微管结合蛋白CRMP5均参与神经突起生长过程,前期已证实Spastin与CRMP5能相互结合并明确相互结合位点,本研究的主要目的在于进一步明确Spastin协同CRMP5如何介导细胞骨架的运动,调控神经突起的生长发育.　　材料与方法:　　首先通过免疫荧光染色,在共聚焦显微镜下观察Spastin与CRMP5在Hela细胞和神经元中共定位的情况;在Hela细胞中过表达SpastinM87V及各截短片并结合共聚焦显微镜观察微管的切割情况;培养原代神经元,并利用磷酸钙转染方法导入SpastinM87V及各截短片,观察神经元突起的变化情况;进一步设计针对Spastin相对特异的干扰小片段si-Spastin导入神经元中并观察对其突起的影响情况;将SpastinM87V及各截短片导入神经元中并记录mEPSC的变化情况;同样,在原代神经元中转染CRMP5观察神经元突起的变化情况;进一步在Hela细胞中共转染SpastinM87V和CRMP5,观察微管切割的变化;同时,在神经元中共转染SpastinM87V和CRMP5,观察神经元突起的变化情况;通过设计不同的分组将质粒导入神经元中,分别观察同时沉默Spastin与CRMP5以及沉默Spastin而过表达CRMP5或沉默CRMP5而过表达Spastin不同处理对神经元突起的影响情况;在神经元中进一步共转染SpastinM87V和CRMP5,观察mEPSC的变化情况.　　结果:　　1)免疫细胞化学结果示:Spastin与CRMP5共存于Hela细胞的胞质,神经元的胞质和突起中.　　2)培养Hela细胞并过表达SpastinM87V、SpastinN190、Spastin△AAA、Spastin△N1、Spastin△N2基因:SpastinM87V和Spastin△N1基因能将Hela细胞微管切割成小片段.　　3)培养原代海马神经元并

关 键 词： 神经突起 生长发育 微管结合蛋白 微管切割蛋白 微管动力

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