导　　师： 黄振

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 小菜蛾Plutella xylostella是十字花科蔬菜上的主要害虫之一，因长期、大量使用广谱性化学杀虫剂，小菜蛾对常用的许多杀虫剂产生了较强的抗药性。玫烟色棒束孢Isaria fumosorosea作为一类重要的昆虫病原真菌可有效地控制小菜蛾种群数量的增长。有研究表明玫烟色棒束孢分泌的类枯草杆菌丝氨酸蛋白酶、丝氨酸类胰蛋白酶、几丁质酶、抗菌肽类等蛋白酶参与了菌体对宿主的侵染;感染玫烟色棒束孢后，小菜蛾体内Serpins基因的表达量明显上调;这表明玫烟色棒束孢在侵染小菜蛾的过程中存在着致病基因与受体基因间的识别、免疫互作关系。本论文通过利用酵母双杂交技术，构建由小菜蛾诱导的玫烟色棒束孢酵母双杂交cDNA文库，以小菜蛾Serpin基因编码的蛋白为诱饵，利用酵母双杂交技术，以期从cDNA文库中筛选出与诱饵蛋白相互作用的蛋白及其相对应的功能基因，明确玫烟色棒束孢与小菜蛾间的互作关系。　　（1）玫烟色棒束孢酵母双杂交cDNA文库的构建与检测　　以小菜蛾为诱导物、培养玫烟色棒束孢菌丝一定时间后，抽滤菌丝并提取菌丝的总RNA，根据Clontech公司的Make Your Own“Mate & PlateTM”Library System试剂盒的操作指南，以反转录的cDNA为模板经LD-PCR扩增获得双链cDNA;将双链cDNA和pGADT7-Rec载体通过同源重组方式共转化到Y187酵母感受态中，获得玫烟色棒束孢酵母双杂交cDNA文库。检测结果表明：文库中插入片段的长度在300～2000bp之间、转化效率为2.2×106cfu/3μg pGADT7-Rec、重组率为100%、库容为2.2×106cfu、滴度为3.12×107cfu/mL。这些数据表明所构建的玫烟色棒束孢酵母双杂交cDNA文库的质量较高，可应用于互作蛋白的筛选。　　（2）诱饵质粒pGBK T7-Serpin的构建及其自激活效应和毒性检测　　抽提经玫烟色棒束孢侵染的小菜蛾总RNA，以反转录的cDNA为模�

关 键 词： 玫烟色棒束孢 文库 小菜蛾 基因 蛋白互作 生物防治

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