导　　师： 向军俭

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 暨南大学

摘　　要： 目的：合成重金属铜人工抗原，制备重金属铜离子的单克隆抗体，建立Cu2+的间接竞争ELISA及直接竞争ELISA，以期对Cu2+的免疫学快速定量测定。　　方法：利用双功能螯合剂p-SCN-Bn-NOTA将Cu2+分别与载体蛋白BSA和OVA偶联，制备免疫原Cu2+-p-SCN-Bn-NOTA-BSA与检测原Cu2+-p-SCN-Bn-N OTA-OVA;用免疫原免疫Balb/c小鼠;免疫数次后，筛选效价高的小鼠进行细胞融合，通过间接ELISA及间接竞争ELISA筛选，建立稳定分泌抗重金属铜的单克隆抗体的杂交瘤细胞株;制备腹水型单抗并进行鉴定，对抗体可变区进行序列测定，利用同源建模、分子对接进行抗原抗体对接模拟;建立间接竞争ELI SA及直接竞争ELISA。　　结果：成功筛选出4株稳定分泌抗重金属铜的单克隆抗体的杂交瘤细胞株B1、B2、B3和B4，四株细胞株产生的抗体亚型都为IgG1型,轻链类型为κ型;B1单抗除对Mn2+存在7.8%的交叉反应外，与Pb2+、Cd2+和NOTA交叉小于1%;B2与三种金属和NOTA都有约3.3%的交叉反应;B3和B4与它们的交叉反应都小于1%，说明它们对铜具有高特异性，不会干扰结果的准确性;其中B4制备出的腹水型单抗效价为8ng/mL;建立间接竞争ELISA的检测灵敏度为29.8ng/mL，检测限为2.4ng/mL，线性范围为4.5-196.7ng/mL;建立基于抗原标记的直接竞争ELISA的检测灵敏度为3ng/mL，检测限为0.4ng/mL，线性范围为0.6-15.1ng/mL;建立基于抗体标记的直接竞争ELISA的检测灵敏度为7.5ng/mL，检测限为0.68ng/mL，线性范围为1.2-45.1ng/mL，方法特异性强，具有可行性，完成对抗原抗体分子对接模拟。　　结论：成功制备出抗重金属铜离子的单克隆抗体，并建立了间接竞争ELISA和直接竞争ELISA。

关 键 词： 铜离子 单克隆抗体 酶联免疫吸附测定 间接竞争 直接竞争

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