导　　师： 何业华

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 凤梨是多年生草本植物,既是世界四大热带果树之一,也是重要的热带观赏植物。凤梨SERK1基因（AcSERK1）是凤梨体细胞胚发生的标记基因（Molecular marker gene）,在非胚性细胞（non-embryogenic cell）向胚性细胞转变过程中起重要作用,已被证明能有效提高凤梨体细胞胚发生率。因此,深入研究凤梨体细胞胚发生初期AcSERK1特异性表达调控的分子机制对揭示细胞分化、胚发生和胚早期退化等的分子机理等有着重要意义。课题组前期相关研究显示:调控AcSERK1在胚性细胞时期发生特异性表达的调控元件在5′上游-983 nt/-881 nt区。本研究在此的基础之上,通过对-983 nt/-881 nt进一步的切分和缺失分析,寻找更精确的胚性细胞特异性区段;采用生物信息学预测分析和酵母单杂交筛库的方法对胚性特异性区段互作蛋白进行了筛选,并从中挑选出两个重要候选基因,并对其在调控体细胞胚发生的作用及机制方面展开了深入研究。主要研究结果如下:1.为进一步缩小胚性细胞特异性调控元件所存在的区域,对AcSERK15′上游-983nt/-881 nt进行切分,构建了一系列植物缺失表达载体,转化凤梨愈伤组织,利用GUS瞬时表达分析技术对调控序列活性进行鉴定,结果表明:AcSERK1 5′上游-921 nt/-881nt的41个碱基序列是启动子胚性细胞特异性活性的必要区段。生物信息学分析发现,与-921 nt/-881 nt区可能存在着互作关系的主要结合位点分别为SEF3MOTIFGM、CAATBOX1、ROOTMOTIFTAPOX1;可能与之结合的转录因子主要为WRKY家族成员,还包括HDZip、KANADⅠ等其他类型的转录因子;另外,该区域内还存在一个与胚胎相关因子SEF3MOTIFGM结合的保守区域。2.以AcSERK1 5′（-921 nt/-881 nt）序列作为诱饵,构建了诱饵载体p Ab Ai-SE41,利用酵母单杂交技术从凤梨体细胞胚c DNA文库中筛选到了33个与-921 nt/-881 nt区可能存在结合关系的蛋白。蛋白功能�

关 键 词： 凤梨 上游 细胞特异性 序列 分离 转录因子

领　　域： [] []