导　　师： 徐江平

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 目的：糖尿病脑病是糖尿病的主要并发症之一，因持续高血糖导致神经细胞损伤是引起中枢神经病变的关键因素。神经生长因子(Nerve growth factor,NGF)是最早被发现的神经营养因子，对神经细胞的生长、发育、分化、存活及受损神经的再生修复具有重要的意义。重组人神经生长因子(Recombinant human nerve growth factor,rhNGF)是一种与人神经生长因子(Human nerve growth factor,hNGF)具有高度同源性的重组蛋白。本实验以PC12细胞为主要研究对象，以高糖处理模拟糖尿病病理状态下的神经细胞受损，考察rhNGF在高糖引起的神经损伤中的保护或修复作用及其可能的作用机制。　　方法：(1)初步评价rhNGF的保护作用：以PC12细胞和原代神经细胞为研究对象，用50-150mM的葡萄糖处理PC12细胞（或原代神经细胞）48h或用100mM的葡萄糖处理PC12细胞24-72h，CCK-8法检测细胞活力，建立高糖损伤的细胞模型，并在此基础上考察rhNGF对高糖损伤的细胞活力的影响。　　(2)考察rhNGF对高糖损伤的细胞凋亡的影响：①利用Hoechst33258染色、Tunel染色法、流式细胞术检测细胞凋亡;②RT-PCR检测凋亡相关因子(Puma、Bcl-2、Bax)的mRNA的水平;③Western blot法检测凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3、p53)的表达。　　(3)考察rhNGF对高糖诱导的氧化应激中的作用：①利用CellROXTM Deep Red Reagent染色检测活性氧(Reactive oxygen species，ROS)水平;②ELISA法检测3-硝基酪氨酸(3-Nitrotyrosine，3-NT)水平。　　(4)信号通路研究：①25ng/mL的rhNGF处理PC12细胞0-20min或不同浓度的rhNGF处理PC12细胞5min，Western blot法检测相关蛋白表达水平(p-AKT、T-AKT、p-ERK1/2、T-ERK1/2);②高糖损伤模型下，给予rhNGF处理，Western blot法检测相关蛋白表达水平(p-AKT、T-AKT、p-ERK1/2、T-ERK1/2、p-FoxO3a、T-FoxO3a);③在加入rhNGF和高糖处理前用GW441756（10μM）、MK-2206(200nM)、SCH772984(200n

关 键 词： 糖尿病脑病 重组人神经生长因子 细胞损伤 药理机制