导　　师： 李茹冰

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 广东药科大学

摘　　要： 目的:缝合常应用于临床手术中创口的封闭,但其不仅难以应用于脆性器官、难以防止组织体液外漏和易引起肥厚性瘢痕增生等。尤其是随着愈合的进展,如何快速有效地促进创面闭合的同时减少瘢痕的形成已成为大家重要的关注点。自1998年以来,FDA批准纤维蛋白粘合剂(FS)在美国使用。之后其被临床广泛应用于封闭和粘合,并且不断推出新产品适用于新的适应症。随着医学的进步和对敷料的严谨性越来越高,具有可降解性和良好生物相容性的纤维蛋白粘合剂已成为粘合封闭创面的首选之一。然而目前国内上市的纤维蛋白粘合剂主要的临床适应症均为止血作用而非粘合作用,因此本研究在成功研发一款新型猪源纤维蛋白粘合剂基础上,围绕该粘合剂对皮肤创伤愈合的作用效果及其机制进行一系列的研究,旨在确定该粘合剂对皮肤愈合的疗效,初步验证其粘合效果,为该粘合剂在临床上应用于皮肤创面治疗提供实验依据。方法:1.CCK-8法检测猪源纤维蛋白粘合剂对L929和HUVECs细胞毒性研究;通过显微镜观察细胞生长形态进一步验证猪源纤维蛋白粘合剂对细胞毒性作用;采用Hoechst/PI双染法进一步探究猪源纤维蛋白粘合剂对L929和HUVECs细胞凋亡的影响。2.通过在SD大鼠背部处皮肤构建一道长为4 cm的全层刀伤模型,给予不同处理方法。通过愈合组织部位拉伸强度,HE染色和Masson三色染色探究猪源纤维蛋白粘合剂对其愈合效果。3.通过Q-PCR和Western Blot从分子和蛋白水平探究猪源纤维蛋白粘合剂促进创口愈合机制研究。结果:1.猪源纤维蛋白粘合剂浸提液分别作用于L929和HUVECs细胞24 h、48 h和72 h后,L929细胞存活率分别为84.64±1.66、81.97±0.31和83.98±2.42,其存活率低于空白对照组(P<0.05)。而猪源纤维蛋白粘合剂浸提液对HUVECs细胞在24 h、48 h和72 h时细胞存活率分别为98.76±6.07、96.80±1.88和88.74±2.21,由此可得猪源纤维蛋白粘合剂浸提液处理HUVECs细胞24 h、48 h后对细胞并没有显著性影响,但在72 h时其存活率低于空白对照组(P<0.05)。根据标准对粘合剂浸提液的细胞毒性进行判定,猪源纤维蛋白粘合剂细胞毒性为0-1级别,毒性较小。通过显微镜观察进一步验证了猪源纤维蛋白粘合剂对L929和HUVECs细胞形态结果显示其对细胞生长形态没有显著性影响。深入验证猪源纤维蛋白粘合剂对细胞凋亡的影响可发现猪源纤维蛋白粘合剂浸提液处理细胞24 h后,细胞凋亡不明显,与对照组没有显著性差异。进一步提示了猪源纤维蛋白粘合剂毒性较小,具有良好的生物相容性。2.建立SD大鼠背部皮肤创伤愈合模型,通过其愈合组织拉伸强度初步判断其伤口愈合速度,结果提示了在愈合初期开始时猪源纤维蛋白粘合剂对伤口愈合起了促进的效果。接着对伤口愈合部位进行HE和Masson染色从病理形态上验证了猪源纤维蛋白粘合剂能够较快地促进表皮再上皮化和胶原沉积从而促进伤口的愈合。3.采用Q-PCR实验探究猪源纤维蛋白粘合剂对与促进皮肤愈合的VEGFA mRNA、bFGF mRNA、CollagenⅠmRNA和TGF-β1 mRNA表达影响和应用Western Blot探究猪源纤维蛋白粘合剂对VEGFA、bFGF、CollagenⅠ、TGF-β1和α-SMA蛋白的表达影响。实验结果显示Q-PCR结果与Western Blot结果几乎一致,在愈合初期,猪源纤维蛋白粘合剂通过上调bFGF、VEGFA和α-SMA而促进了伤口愈合,同时下调了与瘢痕相关的CollagenⅠ、TGF-β1蛋白表达。在愈合重塑期,猪源纤维蛋白粘合剂组及时促进了成肌纤维细胞的凋亡,降低了α-SMA蛋白的表达。结论:猪源纤维蛋白粘合剂具有良好的生物相容性,能够促进皮肤伤口愈合。更多还原

关 键 词： 猪源纤维蛋白粘合剂 [1360104]粘合 [2022430]生物相容性 机制研究

分 类 号： [R96]

领　　域： []