导　　师： 季煜华

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 暨南大学

摘　　要： 第一部分小鼠血清外泌体小RNAs的组成、来源及其生物学意义目的探讨正常小鼠血清外泌体小RNAs的组成、来源及其生物学意义。方法使用Exoquick沉淀法纯化小鼠血清外泌体,之后分别采用透射电镜、纳米粒子追踪法(Nanoparticle tracking analysis,NTA)和Western blot法对外泌体进行形态学和分子表型鉴定。此外,使用小RNAs测序的方法检测小鼠血清外泌体的小RNAs组成,鉴定已知miRNAs和预测新型miRNAs。根据获得的小鼠血清外泌体miRNAs表达谱和已有的细胞和/或组织特异性miRNAs的文献资料推测血清外泌体的可能来源。用Ingenuity Pathway Analysis(IPA)软件对表达丰度最高的前20个miRNAs的靶标进行预测,并对这些预测的靶标进行分子和细胞功能分析。最后,用免疫荧光显微镜观察SYTO标记的血清外泌体被小鼠巨噬细胞系RAW264.7摄取的情况以及qRT-PCR检测小鼠血清外泌体对该细胞表型的影响。结果本研究使用ExoQuick沉淀法从C57BL/6小鼠血清中获得的颗粒符合外泌体的主要特征。通过小RNAs测序发现tRNA片段和miRNAs是血清外泌体中两种主要的RNAs种类,分别约占mapped reads的60%和10%。此外,两次独立重复实验共鉴定到466个已知和11个新预测的mi RNAs,其中表达丰度最高的5个miRNAs(miR-486a-5p,miR-22-3p,miR-16-5p,miR-10b-5p和miR-27b-3p)约占所有aligned miRNAs序列的60%。从已知的细胞或组织特异性miRNAs的特性推断出小鼠血清外泌体主要来源于红细胞,肝脏和肠细胞。生物信息学分析显示,表达丰度最高的前20个miRNAs中半数以上与炎症反应有关,并且进一步的体外实验证明小鼠血清外泌体显著促进巨噬细胞向M2型极化。结论本研究结果为将来利用血清外泌体作为生物标志物以及推断它们的起源提供理论依据,还提示了小鼠血清外泌体在正常情况下维持机体内环境稳态的作用。第二部分脑缺血损伤增加血清外泌体中一�

关 键 词： 血清外泌体 小 测序 急性缺血性脑损伤 生物标志物 炎症反应

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