导　　师： 王慧君

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 本文主要从以下几方面进行论述：　　第一部分 MDM4在参与甲基苯丙胺激活小胶质细胞中的作用机制研究　　目的：　　本研究拟通过建立METH神经毒性体外模型，利用免疫学及分子生物学等技术，探讨在METH诱导的小胶质细胞激活中MDM4的作用机制，并通过分子生物学手段调控MDM4的表达，检测MDM4对小胶质细胞激活的调控作用及可能涉及到的分子通路，从而研究METH诱导小胶质细胞活化的可能分子机制，为进一步明确MDM4在METH激活小胶质细胞活性中的调控机制奠定基础　　方法：　　1.METH诱导小胶质细胞自噬及MDM4升高模型建立　　(1)接种BV2细胞细胞至6孔板中，5％CO2和37℃条件下培养细胞，待长至60-80％汇合程度时，分别用溶于2％FBS的DMEM高糖培养基的METH浓度为0mmol/L、0.4mmol/L、0.8mmol/L、1mmol/L、2mmol/L、3mmol/L处理24小时。提取总蛋白，Western Blot检测MDM4的表达水平及自噬相关分子的表达水平，根据METH浓度梯度处理后MDM4的变化趋势确定合适的METH给药浓度。　　(2)根据上述实验的结果中MDM4及自噬的变化趋势，选择最适合的METH处理浓度，并以该浓度处理0h、6h、12h、24h、36h及48h，以此建立时间梯度处理实验，处理相应时间后，提取总蛋白，Western Blot检测细胞MDM4的表达水平及自噬的分子的表达水平，根据METH时间梯度处理后MDM4的变化趋势确定合适的METH给药时间。　　2.MDM4在小胶质细胞自噬、活化中作用　　(1)根据MDM4的mRNA序列，设计MDM4的siRNA干扰片段，使用lipo-3000脂质体转染说明书的方法转染siRNA，将BV2分为8组，分别是空白对照、对照+小干扰1、对照+小干扰2、对照+小干扰3、给药组、给药+小干扰1、给药+小干扰2、给药+小干扰3，处理24小时后，Western Blot检测细胞MDM4的表达水平自噬及炎症反应的变化情况，根据结果选择有效的特异性siRNA。　　

关 键 词： 甲基苯丙胺 小胶质细胞 蛋白 细胞自噬 炎症反应 肝毒性 木犀草素 实验药理