导　　师： 蒋红霞

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 艰难梭菌作为一种重要的人畜共患病病原菌，越来越多的在无症状食品动物中被检出，以及越来越多关于动物源和人类艰难梭菌基因同源的报道，使得了解动物源艰难梭菌的分子流行病学和抗生素耐药性刻不容缓，目前艰难梭菌感染尚未在我国引起足够重视，我国关于动物源艰难梭菌的相关研究仍然空白。因此，本研究采集我国部分地区腹泻食品动物粪便标本，针对性分离艰难梭菌，然后运用毒素基因检测、核糖体分型和抗生素敏感性测定等分子生物学方法，旨在了解动物源艰难梭菌的毒素、分型及耐药性，分析是否存在区域感染暴发流行，为监测我国区域性艰难梭菌流行型别和动物源艰难梭菌耐药性提供数据。　　2016年3月至2016年8月期间，从广东、湖北、山东、河南等地各大养殖场共采集到腹泻动物（猪、鸡、鸭等）粪便标本538份（其中猪、鸡、鸭的样品数分别为398、121、19），采用芽孢富集法分离艰难梭菌临床分离株。分离到的菌株通过 PCR检测毒素A、B编码基因tcdA、tcdB和二元毒素编码基因cdtA/B。然后用核糖体分型（Ribotyping）和MLST对所有菌株进行分子分型，用琼脂稀释法测定艰难梭菌临床分离株对包括甲硝唑、非达霉素、万古霉素、克林霉素等在内的17种抗生素的MICs。　　从538份粪便样品中共分离到44株艰难梭菌，分离率为8.2%。其中猪源31株，分离率为7.8%;鸭源4株，分离率约为21.1%;鸡源9株，分离率约为7.4%。44株艰难梭菌中有39株为产毒株，14株为A+B+CDT+，占35.89%;13株为A+B+，占33.3%;12株为A-B+，占30.7%，未检测出A+B-菌株。PCR扩增7个管家基因，产物测序以及MLS T数据库在线比对得出等位基因值，44株艰难梭菌共分为7个ST型，来源于3个Clade，主要是Clade1和4。最常见的ST型是ST11（14株）、其次为ST109（9株）、ST35（9株）、ST48（6株）

关 键 词： 艰难梭菌 艰难梭菌毒素 核糖体分型 抗生素 耐药性

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