导　　师： 曹庸

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 牛乳促睡眠肽具有不同于传统的中草药促睡眠物质，它来源于酪蛋白酶解液。本研究的实验原料从工厂生产完酪蛋白磷酸肽后的牛乳多肽中获取牛乳促睡眠肽粗提取，借助分离纯化技术及电生理膜片钳方法，得到牛乳促睡眠肽P3和促睡眠肽单体1、单体2、单体3、单体4，然后通过大鼠戊巴比妥钠协同模型，获取P3及其促睡眠产品不但具有缩短大鼠入睡时间、延长大鼠睡眠时间，而且结合大鼠PCPA失眠模型，研究了牛乳促睡眠肽的促睡眠机理。采用LTQ及电生理膜片钳技术，对单体1、单体2、单体3、单体4进行结构鉴定和促睡眠活性探索。同时，将牛乳促睡眠肽结合百合、酸枣仁药食同源的中草药，复配成一款具有较好促睡眠功效的促睡眠产品。　　（1）牛乳促睡眠肽的分离纯化及结构鉴定　　通过中高压柱层析、制备液相以及高效分析液相等分离纯化方法，对牛乳促睡眠肽粗提物进行分离纯化。结合 LTQ-Orbitrap液-质联用对分离的牛乳促睡眠肽进行结构鉴定。结果表明，牛乳促睡眠肽分离出4个具有较好促睡眠效果的多肽单体，简称单体1、单体2、单体3、单体4，其氨基酸序列依次为：HQGLPQEVLNENLLR、YKVPQLEIVPNSAEER、HPIKHQGLPQEVLNENLLR和 VPQLEIVPNSAEER。该四个单体皆为首次发现的具有较好促睡眠效果的牛乳多肽。　　（2）应用电生理膜片钳技术研究牛乳促睡眠肽的体外促睡眠活性　　本研究主要借助大鼠离体脑片，采用电生理膜片钳技术，根据牛乳促睡眠肽对大鼠下丘脑腹外侧视前区神经元的放电特征，探索牛乳促睡眠肽的体外促睡眠活性。结果表明，牛乳促睡眠肽单体1、单体2、单体3、单体4均有较好的促睡眠活性，均具有较好的抑制平均AP诱发的个数，作用后Vm均具有显著性变化。根据抑制VLPO神经元效果对比发现，单体2的抑制效果最好，而单�

关 键 词： 牛乳 促睡眠肽 结构鉴定 作用机制 分离纯化 活性评价

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