导　　师： 乔荣勤

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 广州中医药大学

摘　　要： 目的:利用腺病毒过表达和沉默技术研究Wnt信号通路抑制因子Sost在大鼠骨形成中的作用,探索补肾健脾活血方对Sost,Wnt2,OPG和BMP2的影响。方法:1、实验动物:4月龄雌性SD大鼠28只。2、实验分组:分为A.空白对照组,B.空载腺病毒组,C.过表达Sost组,D.沉默Sost组,每组设置7只大鼠,共4组。3、给药方式及剂量:将包装好的大鼠腺病毒采用腹腔注射方法,注射量为病毒滴度(1010),200ul/只。空白对照组（A组）不注射病毒;空载腺病毒组（B组）腹腔注射空载腺病毒。过表达Sost组（C组）腹腔注射过表达Sost腺病毒,沉默Sost组（D组）腹腔注射沉默Sost腺病毒。4、1个月后,C组和D组的1-4号大鼠给予补肾健脾方中药灌胃,A组和B组的1-4号大鼠给予等量的生理盐水灌胃。2个月后,处死各组大鼠,检测大鼠股骨骨密度（BMD）;（1）采用实时荧光定量PCR检测腺病毒过表达或沉默Sost后大鼠组织中Wnt2、OPG、Sost、BMP-2的基因表达情况。（2）采用WB技术检测通路蛋白Wnt2、OPG、Sost、BMP-2蛋白的表达。结果:1、腺病毒转染大鼠注射腺病毒1周后,采取各组大鼠血清进行荧光PCR定性检测,结果分析表明除空白对照组外,余下各组的腺病毒含量Cq值均在26-30之间,重组腺病毒成功转染大鼠。2、各组大鼠股骨BMD变化在空白对照组和空载腺病毒组中,灌胃生理盐水对大鼠骨密度的变化无明显影响（P>0.05）;在过表达Sost组中,不灌胃的情况下过表达Sost可以降低大鼠骨密度（P<0.05）,而灌胃补肾健脾活血方后,大鼠骨密度呈升高趋势,差异具有统计学意义（P<0.05）;在沉默Sost组中,不灌胃的情况下沉默Sost对大鼠骨密度无明显变化,而灌胃补肾健脾活血方后,大鼠骨密度呈升高趋势,差异具有统计学意义（P<0.05）。3、补肾健脾活血方对大鼠Wnt2、OPG、Sost、BMP-2 mRNA的影响在空白对照组和空载腺病毒组中,灌胃生理盐水对大鼠Wnt2、OPG、Sost、BMP-2mRNA的表达无明显影响（P>0.05）;在过表达Sost组中,不灌胃的情况下过表达Sost可以升高Sost mRNA的表达（P<0.05）,降低Wnt2、BMP-2 mRNA的表达（P<0.05;P<0.05）,而OPG mRNA的表达未见明显变化;灌胃补肾健脾活血方后,可以提高Wnt2、BMP-2 mRNA的表达（P<0.05;P<0.05）,降低Sost、OPG mRNA的表达（P<0.05;P<0.05）;在沉默Sost组中,不灌胃的情况下沉默Sost可以提高Wnt2 mRNA的表达（P<0.05）,降低Sost mRNA的表达（P<0.05）,而OPG、BMP-2 mRNA的表达未见明显变化;灌胃后,补肾健脾活血方可以提高Wnt2、BMP-2 mRNA的表达（P<0.05;P<0.05）,降低Sost、OPG mRNA的表达（P<0.05;P<0.05）。4、补肾健脾活血方对大鼠Wnt2、OPG、Sost、BMP-2蛋白的影响在空白对照组和空载腺病毒组中,灌胃生理盐水对大鼠Wnt2、OPG、Sost、BMP-2蛋白的表达无明显影响（P>0.05）;在过表达Sost组中,不灌胃的情况下过表达Sost可以升高Sost蛋白的表达（P<0.05）,降低BMP-2蛋白的表达（P<0.05）,而Wnt2、OPG蛋白的表达未见明显变化;灌胃补肾健脾活血方后,可以提高BMP-2蛋白的表达（P<0.05）,降低OPG、Sost蛋白的表达（P<0.05;P<0.05）,而Wnt2蛋白的表达未见明显变化;在沉默Sost组中,不灌胃的情况下沉默Sost可以提高Wnt2、BMP-2蛋白的表达（P<0.05;P<0.05）,降低Sost蛋白的表达（P<0.05）,而OPG蛋白的表达未见明显变化;灌胃后,补肾健脾活血方可以提高Wnt2、BMP-2蛋白的表达（P<0.05;P<0.05）,降低OPG、Sost蛋白的表达（P<0.05;P<0.05）。结论:1、过表达Sost可以升高Sost mRNA的表达,降低Wnt2、BMP-2 mRNA的表达;升高Sost蛋白的表达,降低BMP-2蛋白的表达,降低SD大鼠股骨骨密度;2、沉默Sost可以升高Wnt2 mRNA的表达,降低Sost mRNA的表达;升高Wnt2、BMP-2蛋白的表达,降低Sost蛋白的表达;3、补肾健脾活血方干预后,可以提高SD大鼠股骨骨密度,提高Wnt2、BMP-2 mRNA及蛋白的表达,降低Sost、OPG mRNA及蛋白的表达。更多还原

关 键 词： [7923777]WNT通路 [100152606]SOST 腺病毒 [6147577]骨形成 [8802660]补肾健脾活血方

分 类 号： [R285.5]

领　　域： []