导　　师： 林宏生;郭国庆

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 暨南大学

摘　　要： 目的本研究主要探讨微管切割蛋白Spastin如何调控AMPA受体GluA1亚基的内化。材料与方法首先我们构建了Spastin及其截短片段的各种表达载体,用pull down和Co-IP的实验方法,明确Spastin和GluA1存在相互作用及其具体结合部位;然后在海马神经元中观察Spastin和GluA1在神经元中树突及树突棘的共定位情况;接下来在GluA1-HEK293T稳定细胞株及海马神经中过表达Spastin WT,通过免疫荧光以及提取细胞膜蛋白观察Total GluA1和Surface GluA1的表达变化,并用全细胞膜片钳记录AMPA电流和mEPSC的变化;最后构建Spastin功能域的真核表达突变体,在稳定细胞株和海马神经元中过表达,明确Spastin WT及其各功能域对GluA1的具体影响。结果1)通过pull down和Co-IP实验中明确Spastin与GluA1存在相互作用,且作用部位位于Spastin的MIT功能域和GluA1的C末端;2)GluA1-HEK293T稳定细胞株及神经元中过表达Spastin WT,可抑制细胞膜GluA1的表达;3)Spastin WT及Spastin△MIT片段能够切割微管,而对照组、Spastin△MTBD、Spastin△AAA、Spastin C413Y片段则不能切割微管;4)稳定细胞株及神经元中过表达Spastin WT及其结构域突变体,切割微管功能及MIT结构共同促进GluA1内化。结论1)Spastin与GluA1存在相互作用,相互作用部位为Spastin的MIT功能域及GluA1的C末端;2)Spastin WT能促进GluA1的内化;3)Spastin的切割功能和MIT功能域共同促进GluA1内化。

关 键 词： 内化 微管切割 功能域

领　　域： []