导　　师： 严寒静

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 广东药科大学

摘　　要： 广藿香（Pogostemon cablin（Balnco） Benth.）为唇形科刺蕊草属植物，具有芳香化浊，开胃止呕，解暑的功效，为“十大广药”之一，其中以“石牌”品种最优。为解决抗性下降、资源短缺的现状，考虑以广藿香原生质体对称融合的多倍体育种方法改良品种，可以在提高石牌广藿香有效成分及产量的基础上避免化学诱导多倍体带来的嵌合体缺陷;此外，在原有研究基础上通过添加MeJA诱导子的广藿香悬浮细胞与空白对照的转录组数据分析，建立原始数据，挖掘相关转录因子，更深入地探究茉莉酸信号参与调控的百秋李醇生物合成机制，为提升广藿香药源品质及其可持续开发利用提供新的思路和技术手段。主要研究结果如下：　　（1）广藿香悬浮细胞原生质体分离　　在原有实验基础上优化了酶解分离方案，考察了预处理方法、酶液pH、酶解温度对广藿香原生质体分离的影响。最终确定选取培养9-15 d处于对数生长期的广藿香悬浮细胞为原材料，混合酶液选用纤维素酶、半纤维素酶和果胶酶，质量体积比依次为1.5％、0.5%、0.8%，酶液渗透势以0.4moL/L甘露醇调节，pH设为5.8，温度25℃，以50rpm避光振荡酶解12h，最终产量为13.2×105个/g，活力为81.8%。　　（2）广藿香悬浮细胞原生质体培养　　原生质体培养主要考察了培养方法、培养密度、培养基激素配比、铵盐含量、碳源、酸水解酪蛋白含量。最终确定以铵盐减半的MS1培养基进行海藻酸钠包埋，激素选用0.2mg/L NAA、2.0mg/L6-BA，培养密度为2.0×105个/mL，蔗糖添加量1.0%，酸水解酪蛋白500mg/L。在培养第6天观察到细胞第一次分裂，14天左右细胞开始大量分裂，分裂频率为6.91%，第16天形成细胞团，植板率为1.83%，培养第63天左右观察到肉眼可见愈伤组织。　　（3）广藿香悬浮细胞原生质体融合　　本实验以�

关 键 词： 广藿香 原生质体融合 多倍体育种 茉莉酸甲酯 转录组调控 百秋李醇 生物合成

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