导　　师： 杜虹

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 汕头大学

摘　　要： 传统的观点认为藻类主要吸收无机氮，近年来发现越来越多的藻类可以直接利用有机氮源。随着人类活动的增加，天然水域中有机氮的占比越来越高，因此藻类利用有机氮的相关研究愈发重要。本研究以模式生物莱茵衣藻（Chlamydomonasreinhardtii）为研究材料，根据不同的氮源（尿素CO(NH2)2和氯化铵NH4Cl），和不同的氮浓度设置实验组，分为缺氮组（氮原子浓度为0mM）、正常氮浓度组（氮原子浓度为7mM，分为正常氨氮组、正常尿素组、正常混合组（尿素、氯化铵各提供3.5mM氮原子））和高氮浓度组（氮原子浓度为70mM，分为高浓度氨氮组、高浓度尿素组、高浓度混合组（尿素、氯化铵各提供35mM氮原子）），以正常氨氮组作为对照，研究了不同氮源及氮浓度处理对莱茵衣藻生长、细胞数、总叶绿素等生化指标的影响，并用qRT-PCR探讨了不同氮源及氮浓度处理下，莱茵衣藻尿素代谢关键酶基因在转录水平的表达情况。本研究还进一步使用CRISPR-Cas9技术对脲基甲酸盐水解酶DUR2基因进行敲除实验，以期为尿素代谢关键酶基因的功能研究奠定基础。　　本文主要研究结果如下：　　1.不同的氮源及氮浓度培养莱茵衣藻，基础生理结果显示：在3个正常氮浓度组中，培养10d后细胞数范围均在7.0～7.5×106个/mL，组间没有显著性差异（p＞0.05）。在高浓度氮源3个组中，细胞数均在1.6～2.0×106个/mL范围内，通过显微镜观察发现高浓度各组中均有3～4个细胞聚集的现象，可能与细胞胁迫产生EPS有关。而缺氮组，培养10d细胞数仅为2.3～5.3×105个/mL。综上可见莱茵衣藻在正常氮浓度下生长是最好的，且以氨氮和尿素为氮源下的生长能力一致。缺氮及高氮源组都能抑制细胞的生长，其中抑制程度最大的是缺氮组。　　2.本研究使用qRT-PCR技术分析不同的氮源及氮浓度培

关 键 词： 莱茵衣藻 氮源响应 尿素代谢关键酶 脲基甲酸盐水解酶

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