导　　师： 邹永东;郑易之

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 深圳大学

摘　　要： LEA(Late embryogenesis abundant proteins,LEA proteins)蛋白为固有无序蛋白(Intrinsically disordered proteins,IDPs),在提高植物抗逆性方面发挥重要保护功能。大量证据表明,LEA蛋白在逆境胁迫下,可保护蛋白质(酶活性)、脂类及细胞膜结构,具有结合金属离子及抗氧化作用,但LEA蛋白是否可与DNA结合,有关证据还不多见。大豆PM1蛋白属于第4组LEA蛋白,等电点为10.2,可定位于细胞核和细胞质中。本文将以PM1蛋白及其N端(PM1-N)和C端(PM1-C)蛋白为对象,研究它们与3种不同长度的DNA和2种环形/线形质粒的相互作用,以及6种金属离子(Zn、Mg、Ca、Ni、Mn和Cu)和3种pH值(6.3、8.0和10.2)对(PM1/PM1-N/PM1-C)蛋白与DNA分子互作的影响。利用凝胶阻滞实验(Electrophoretic mobility shift assay,EMSA)研究PM1蛋白与5种DNA分子的相互作用以及金属离子对其相互作用的影响。当PM1蛋白分别与5种DNA溶液混合并温浴后,进行琼脂糖凝胶电泳。结果显示,PM1蛋白可与5种DNA分子发生相互作用。再将PM1蛋白分别与5种DNA混合,加入6种金属离子溶液,共同温浴。结果显示,6种离子对PM1蛋白与DNA的互作无明显影响。同时,3种pH值对二者的互作也无明显影响。进一步利用滤膜结合实验(Filter binding assay,FBA)研究PM1蛋白及其N端和C端蛋白与DNA分子的互作以及金属离子对其相互作用的影响。用异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate,FITC)标记2种DNA(PM1和pGL3),进行以下实验:1)将(PM1/PM1-N/PM1-C)蛋白分别与2种DNA溶液混合并温浴。FBA结果显示,(PM1/PM1-N/PM1-C)蛋白可与2种DNA分子相互作用。2)将(PM1/PM1-N/PM1-C)蛋白分别与6种金属离子溶液混合,再加入DNA。FBA结果显示,4种离子(Zn、Mg、Ca和Mn)对(PM1/PM1-N/PM1-C)蛋白与DNA的互作无明显影响,而2种离子(Ni和Cu)可明显减弱(PM1/PM1-N/PM1-C)蛋白与DNA的互作。3)将上述加样顺序改为:(PM1/PM1-N/PM1-C)蛋白与2种DNA溶液混合后,再加入6种金属离�

关 键 词： 蛋白与 的互作 胚胎发育晚期丰富蛋白 大豆 蛋白 金属离子

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