导　　师： 高毅

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 南方医科大学

摘　　要： 目的:探索10H-3，6-二氮杂吩噻嗪对肝癌细胞HepG2生物学行为的影响及其作用机制，为肝癌的综合治疗提供新的思路。　　方法:本研究设计将样品分为三组，即未接受治疗的未治疗组，接受标准对照顺铂IC50浓度的阳性对照，以及接受测试化合物10H-3，6-二氮杂吩噻嗪(PTZ)的IC50浓度的治疗组，PTZ化合物的合成参照出版物获得的信息合成，肝癌细胞株选择HepG2。通过MTT实验进行增殖功能测定，通过吖啶橙/碘化丙啶双重染色(AO/PI)双染色评估细胞凋亡的形态，通过膜联蛋白Ⅴ-FITC染色定量细胞凋亡，Transwell实验验证细胞侵袭能力。通过测定细胞内活性氧、线粒体细胞色素c、半胱天冬酶活性及线粒体硫氧还蛋白还原酶的活性去阐释PTZ的抗肝癌作用机制。　　结果:本研究设计将样品分为三组，即未接受治疗的未治疗组，接受标准对照顺铂IC50浓度的阳性对照，以及接受测试化合物PTZ的IC50浓度的治疗组。将HepG2癌细胞接种在96孔平底板中，密度为1×105个细胞/孔。通过将化合物在DMSO(二甲基亚砜)中溶解至80mM的储备浓度，并进一步稀释成2.5，5，10，20，40，80μM，0μM用作未处理的对照，并进一步在CO2培养箱中温育24小时。MTT测试显示PTZ在各浓度范围内对HepG2肝癌细胞显示出生长抑制作用;处理24小时后PTZ对HepG2肝癌细胞50％最大反应(IC50)的抑制浓度为37.03μM，阳性对照(顺铂)给予IC50值为109.23μM。通过吖啶橙/碘化丙啶双重染色(AO/PI)进行定性观察，荧光显微镜下观察可见，PTZ作用后的HepG2癌细胞发生凋亡，癌细胞形成碎片核，凝聚核，释放DNA内容物，形成膜起泡。同时注意到PTZ还诱导肝癌细胞坏死，肝细胞染成整个细胞的红色(图2:红色箭头指向)。　　膜联蛋白Ⅴ-FITC定量测定HepG2癌细胞凋亡，流式细胞学进行凋亡分析显示PTZ对HepG2细胞的抑制的效力比阳性对�

关 键 词： 肝癌 二氮杂吩噻嗪 肝癌细胞系 线粒体硫氧还蛋白还原酶 氧化损伤