导　　师： 何小维

授予学位： 博士

作　　者： (）;

机构地区： 华南理工大学

摘　　要： 近年来,食品安全问题越来越受到人们的关注与重视,为了防止食源性致病菌污染导致食物中毒的发生,减少食品安全隐患,从食物的源头及食品的生产、加工过程中进行致病菌检测十分必要。因此,研究针对食源性致病菌的快速检测方法、探索标准化的检测模式具有十分重要的意义。由于免疫层析技术具有简单、快速、灵敏度高及稳定性好等特点,而荧光微球有比较稳定的形态结构及发光行为,受外界环境的影响比纯荧光化合物小,而且容易通过荧光信号的测定而达到快速定量,近年来被广泛应用于生物标记检测中。把荧光微球标记技术与免疫层析技术结合建立基于荧光微球的免疫检测模式(FM-ICA),应用免疫磁分离技术(IMS)富集和浓缩食品中的食源性致病菌,探讨层析过程中的影响因素,并对FM-ICA检测方法进行评价。本研究通过免疫雄性大白兔制备了三种食源性致病菌的多克隆抗体,并与市场购买的单克隆抗体进行了ELISA配对筛选,得到几对能用于双抗夹心的抗体对,并对它们的特异性进行了调查。结果表明,所筛选到的抗体对特异性较好。采用EDC/NHS偶联法,把磁性微球与多克隆抗体进行偶联,筛选到四种性能较好的磁性微球,其中PM3磁珠平均粒径为190.9 nm,xMag-C和xMag-N磁珠的平均粒径分别为1150 nm和1545 nm,EM1磁珠平均粒径为469.7 nm,四种磁珠的粒径分布都较为均匀,分散性较好;不同磁性微球由于粒径不同,磁性微球表面的羧基含量不一样,偶联抗体的量不一样,EM1磁珠偶联量为120μg/mg,而xMag-C和xMag-N两种磁珠偶联量为160μg/mg,PM3纳米磁珠的偶联量在240μg-280μg/mg;利用xMag-C制备了三种食源性致病菌的免疫磁珠,对1×10~4 CFU/mL菌液,加入0.25-0.5 mg免疫磁珠能使捕获率达到80%以上,磁珠捕获时间为30-45 min,食品基质的稀释倍数对捕获率有显著影响,固体样本稀释20倍,菌体的回收率

关 键 词： 荧光微球 免疫层析技术 免疫磁珠 食源性致病菌 检测方法

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