导　　师： 孙京臣

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 家蚕（Bombyx mori）是一种具有重要经济价值的鳞翅目模式昆虫。引起家蚕致病的病原有很多种，家蚕核型多角体病毒（Bombyx mori nucleopolyhedrovirus，BmNPV）是其中危害较为严重的一种。蚕业生产中，使用化学药剂进行消毒的传统方法预防蚕病具有很大的局限性，培育抗性品种成为了防治蚕病的一种有效方法。近年来许多研究人员对家蚕抗性品种的培育开展了很多的研究，但是培育抗性品种的常规方法存在周期长、效率低等缺点。RNAi是生物体中普遍存在的一种现象，并且在昆虫防治中已经得到广泛的应用，利用RNAi结合转基因技术有望提高家蚕对BmNPV的抗性。　　研究表明ie1、gp64和 ie0基因在 BmNPV增殖复制的过程中起着重要的作用，本研究将ie1基因的1-545 bp、gp64基因的1-507 bp和ie0基因的1-525 bp区域以反向串联的方式连接，构建能够在细胞体内稳定转录产生 dsRNA的转移载体pF-A3-die1-IM、pF-A3-dgp64-IM、pU-A3-die0-IG和pF-A3-die1-dgp64-IM，利用Invasin介导的DAP营养缺陷型E.coli BmMultiBac/△asd Sw106/PGB2ΩInv菌株构建重组菌株rSw106-Bm-pF-A3-IM、rSw106-Bm-pF-A3-die1-IM、rSw106-Bm-pF-A3-dgp64-IM、rSw106-Bm-pF-dA3-die1-dgp64-IM-pU-A3-die0-IG、rSw106-Bm-pF-dA3-die1-dgp64-IM、rSw106-Bm-pF-A3-die1-IM-pU-A3-die0-IG、rSw106-Bm-pU-A3-die0-IG和 rSw106-Bm-pF-A3-dgp64-IM-pU-A3-die0-IG。用重组菌株侵染BmN细胞，利用杆状病毒多基因表达系统获得重组杆状病毒 BmBV-pF-A3-IM、BmBV-pF-A3-die1-IM、BmBV-pF-A3-dgp64-IM、 BmBV-pU-A3-d ie0-IG、 BmBV-pF-A3-die1-dgp64-IM、BmBV-pF-A3-die1-IM-pU-A3-die0-IG、 BmBV-pF-A3-dgp64-IM-pU-A3-die0-IG和BmBV-pF-A3-die1-dgp64-IM-pU-A3-die0-IG。TCID50法测定重组杆状病毒滴度，将重组病毒稀释101、102和103倍后注射5龄1 d家蚕幼虫，24 h观察一次，并记录结果。　　结果分析显示，注射10-1的重组病毒后，实验组家蚕幼虫的发病时间和死亡时间比阳性对照

关 键 词： 家蚕 技术 转基因技术 病毒 增殖复制 抑制作用

领　　域： []