导　　师： 张冬梅

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 暨南大学

摘　　要： 目的：研究23-羟基白桦酸衍生物B4G2对人肝癌细胞株HepG2的增殖抑制作用及其作用机制　　方法：（1）MTT法检测B4G2对四种肝癌细胞株的增殖抑制作用;（2）克隆形成实验检测B4G2对HepG2细胞的长期增殖抑制作用;（3）PI染色观察B4G2对HepG2细胞周期的影响;（4）Hoechst33528染色实验观察核染色质的变化;（5）Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡率;（6）透射电镜观察细胞亚显微结构;（7）蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白caspase家族、PARP及Bcl-2家族的表达水平;（8）JC-1染色实验检测线粒体膜电位变化;（9）Fluo-3-AM染色检测细胞内钙离子水平;（10）H2DCFDA荧光探针检测ROS含量的变化;（11）MDC染色观察自噬小体;（12）Mito-tracker荧光探针定位线粒体;（13）ATP检测试剂盒检测细胞ATP水平　　结果：B4G2能较强地抑制HepG2、Hep3B、Bel-7402、HepG2/ADM四种肝癌细胞株的增殖，B4G2对HepG2的增殖抑制作用呈现剂量依赖性。对细胞周期的检测表明，随着给药浓度增加，HepG2细胞的SubG1凋亡峰逐渐累积。Hoechst33528染色实验表明B4G2可以造成染色质凝集固缩。透射电镜观察细胞发现，B4G2给药后细胞在形态学上出现明显的凋亡现象。流式细胞仪检测Annexin V-FITC/PI染色的细胞显示，B4G2诱导细胞出现早期凋亡和晚期凋亡都呈现剂量依赖性。Western blot免疫印迹法检测凋亡关键蛋白，发现caspase3、caspase8、caspase9和PARP都有明显的剪切活化，但caspase的抑制剂Z-VAD-FMK不能逆转B4G2诱导的凋亡。JC-1染色显示，B4G2可造成线粒体膜电位去极化，进而引起凋亡前体蛋白细胞色素C透膜释放到胞浆中去。B4G2还可以促进细胞内ROS和钙离子水平的升高，抗氧化剂NAC可以抑制二者的升高，逆转线粒体膜电位的降低，拮抗B4G2诱导的凋亡。同时PT孔的抑制剂MgCl2也可以拮抗细胞凋亡。进一步研究表明，B4G2可以诱导细�

关 键 词： 肝癌 羟基白桦酸衍生物 抗癌活性 细胞凋亡 线粒体 自噬行为

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