导　　师： 杨婉莹

授予学位： 硕士

作　　者： (）;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 肽聚糖识别蛋白（peptidoglycan recognition protein，PGRP）是昆虫中非常重要的一类模式识别受体，它可以特异性的识别细菌细胞壁中的肽聚糖（peptidoglycan，PGN），从而参与到机体免疫调节和细菌清除中。果蝇（Drosophila melanogaster）中PGRPs的研究已经相对透彻，其功能也研究的比较清楚，但是关于鳞翅目昆虫的PGRPs的研究相对较少。　　本实验室在前期研究中发现，家蚕中有6条L型BmPGRP和6条S型BmPGRP，其在不同的组织中有不同的转录表达活性。家蚕在感染细菌后，S型BmPGRP主要在脂肪体中快速转录表达，而L型BmPGRP则主要在中肠中滞后表达，这暗示家蚕中S型BmPGRP可能参与了家蚕的快速免疫反应，即细胞吞噬和黑化反应。同时结构域预测分析也发现S型BmPGRP具有酰胺酶活性，那么S型BmPGRP能否通过对细菌细胞壁肽聚糖的酰胺键的水解达到抑菌效果？本研究以家蚕为研究对象，克隆表达了5条S型BmPGRP基因序列，探讨了其在先天免疫中的作用。获得主要研究结果如下：　　（1）抽提家蚕脂肪体RNA，RT-PCR扩增获得家蚕S型BmPGRP全长基因，克隆至pIEx-4载体上并转染果蝇S2细胞构建稳转细胞系，大量表达目的蛋白并通过Ni-NTA亲和层析将其纯化。　　（2）将纯化的目的蛋白进行抑菌实验，发现BmPGRP-S1/S2对革兰氏阴性细菌（E.coli）具有抑菌活性，BmPGRP-S3/-S4/S5对革兰氏阴性细菌（E.coli）没有抑菌活性;BmPGRP-S1/-S2/-S3/-S4/-S5对革兰氏阳性菌（S.aureus）均没有抑菌活性。BmPGRP-S1对来源于革兰氏阴性菌的DAP-PGN有酰胺酶活性，而对来源于革兰氏阳性菌的Lys-PGN没有活性，BmPGRP-S2/-S3/-S4/-S5对DAP-PGN和Lys-PGN均具有酰胺酶活性，但BmPGRPs对DAP-PGN更具有偏爱性。　　（3）通过BmPGRPs对E.coli的凝集分析发现，BmPGRP-S1/-S2/-S4/-S5对E.coli具有较显著的凝集作用，BmPGRP-S3没有凝集作用;BmPGRPs对B.meg

关 键 词： 家蚕 肽聚糖识别蛋白 肽聚糖 抑菌活性 细胞吞噬

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