导　　师： 陈金顶

授予学位： 硕士

作　　者： ;

机构地区： 华南农业大学

摘　　要： 猪传染性胸膜肺炎（Porcine contagious pleuropneumonia，PCP）是影响全球养猪业的重要细菌性疾病之一，它是一种由胸膜肺炎放线杆菌引起的以肺脏纤维素性胸膜肺炎为主要病变的呼吸道传染病。该病目前在世界范围内广泛流行，给集约化养猪业造成严重的经济损失。我国当前预防该病的主要手段是接种灭活疫苗，但是由于该致病原血清型较多、毒力因子复杂等原因，该疫苗的保护效果不好。因此，开发新型、高效的疫苗已成为防控该病的热点。溶血外毒素和外膜蛋白作为APP的重要毒力因子和免疫原，在该病的感染致病过程中发挥着重要的作用。　　本研究主要内容包括：⑴应用PCR的方法从商品化灭活疫苗中扩增Ap xⅢA和Ap xⅣA基因，并将其克隆到表达载体pET-32a中，再以 PCR、双酶切鉴定和DNA测序验证重组质粒pET-ApxⅢA、pET-ApxⅣA。将重组质粒转化进入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，在 IPTG作用下诱导表达，经 SDS-PAGE和 Western blot检测重组蛋白，结果显示rApxⅢA和rApxⅣA大小分别约为50和45 kD，并证明重组蛋白具有较好的反应原性。⑵在实验室前期研究的基础上，用获得的rAp xⅢA和r Ap xⅣA蛋白，制备成油佐剂免疫小鼠进行免疫实验，免疫分组如下：Ⅰ组为PBS阴性对照，Ⅱ组为商品化三价灭活疫苗阳性对照，Ⅲ组为三价灭活疫苗和白油佐剂乳化的rAp xⅠA、r Ap xⅡA、rApxⅢA、rApxⅣA和 rOMP蛋白混合疫苗，Ⅳ组为弗氏佐剂乳化的rApxⅠA、rApxⅡA、rApxⅢA、rApxⅣA和 rOMP蛋白，Ⅴ组为白油佐剂乳化的rApxⅠA、rApxⅡA、rApxⅢA、rApxⅣA和 rOMP蛋白。每组均分三次免疫，每次间隔2周，每次免疫1周后对小鼠采血，以间接 ELIS A测定小鼠血清特异性抗体变化，第三次免疫1周后对每组小鼠分别以APP1型（4.56×107cfu）进行攻毒。结果显示疫苗Ⅳ、Ⅴ组的抗体水平基本一致�

关 键 词： 猪传染性胸膜肺炎 放线杆菌 蛋白表达 重组亚单位疫苗

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