中文会议： 第九届全国疑难及重症肝病大会论文集

会议日期： 2017-06-02

会议地点： 中国北京

主办单位： 吴阶平医学基金会;全国疑难及重症肝病攻关协作组;北京医药科学技术发展协会;首都医科大学肝病转化医学研究所

出版日期： 2017-05-31

作　　者： ; ;

机构地区： 暨南大学附属第一医院

出　　处： 《第九届全国疑难及重症肝病大会》

摘　　要： 目的:观察CRMP2基因沉默对氨中毒后大鼠海马神经元突起生长的影响;探讨CRMP2基因对神经元突起生长的作用;有利于临床上更加深入的了解肝性脑病的发病机制,并为其治疗及其药品的研发提供可能的理论基础、分子靶点及研究方向。方法:首先设计并订购CRMP2si RNA片段;同时培养293T细胞,然后钙磷转染CRMP2重组质粒和小分子RNA干扰片段或阴性对照片段于293T细胞,裂解提取蛋白,行Western Blot实验,同时用内参抗体GAPDH行内参检测,验证其在神经元外的干扰效率;原代培养大鼠海马神经元至第6天时共转siRNA及GFP,24小时后行ICC,(一抗:CRMP2(兔)1:500二抗:555(兔)1:500),荧光显微镜观察,验证siRNA在神经元内的干扰效率;最后,在体外原代培养SD乳鼠海马神经元,培养至第6天行钙磷转染,沉默CRMP2基因,24小时后加入浓度为1umol/L的氨,再24小时后行细胞免疫化学,固定细胞后,利用免疫荧光染色结合共聚焦显微镜,对氨中毒后的海马神经元的突起形成情况进行系统的观察和分析。结果:(1)体外分离并培养了海马神经元,细胞的接种密度约为1×105个/ml;(2)钙磷转染法将siRNA和阴性对照片段转染293T细胞,24小时后胞内可见绿色荧光分布,细胞的生长状态良好;(3)Western Blot结果显示:阴性对照组CRMP2含量较多,si RNA组CRMP2含量少几乎不表达,内参抗体GAPDH的电泳条带组间无明显差异;(4)siRNA神经元内干扰CRMP2结果显示:转入siRNA的神经元的CRMP2蛋白的显影比较中,NC组较siCRMP2组显影清晰且明亮,而不管是NC组还是siCRMP2组其周围未转入siRNA的神经元的CRMP2都呈现出清晰明亮的显影。(5)氨中毒后的海马神经元将CRMP2基因沉默后,神经元突起减少,突起的总长度减短,复杂程度降低,较对照组差异有统计学意义。结论:(1)成功分离并培养了SD乳鼠的海马神经元;(2)成功将小分子RNA干扰片段转染入293T细胞;(3)设计订购的siRNA在�

关 键 词： 海马神经元 氨中毒 肝性脑病 坍塌反应调节蛋白 细胞骨架

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