中文会议： 中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会论文集

会议日期： 2011-08-15

会议地点： 广州

主办单位： 中国菌物学会,广州市科协,广东省微生物学会&广东省食用菌行业协会

出版方 ： 中国菌物学会

作　　者： ; ; ; ; (林钟石）;

机构地区： 华南农业大学食品学院

出　　处： 《中国菌物学会第五届会员代表大会暨2011年学术年会》

摘　　要： 　　植物次生代谢物(PLANT SECONDARY METABOLITES)白藜芦醇(RESVERATROL,RES)是一种植物保护素(PHYTOALEXIN),对病原菌有防御作用.该化合物是一种抗氧化剂,具有抗癌、抗炎、预防心血管疾病等保健功能.但自然界中存在的RES量比较少,因此利用生物技术合成RES成为必然.白藜芦醇合酶(RESVERATROL SYNTHASE,RS)是RES生物合成中的关键酶,负责催化1分子香豆酰辅酶A(COUMAROYL-COA)和3分子丙二酰辅酶A(MALONYL-COA)生成白藜芦醇.本研究根据已报道的基因序列设计特异引物,运用PCR、RT-PCR技术和SOE (SPLICING BY OVERLAP EXTENSION)法从葡萄中克隆到白藜芦醇合酶基因全长DNA和三个同源基因CDNA序列,三个同源基因分别命名为VRS1、VRS2和VRS3.白藜芦醇合酶基因DNA序列全长1610BP,包含一个内含子；VRS1、VRS2和VRS3全长分别为1241BP、1182BP 1241BP,其中VRS,VRS3在5′端含有59BP的非编码区,VRS2在5′端不含非编码区,但三者都包含一个1179BP的开放阅读框,编码392个氨基酸.同源性分析表明,VRS1、VRS2、VRS3序列相似性最低为97.58％,其编码的氨基酸序列一致性最低为98.72％；分别将VRS1、VRS2、VRS3序列与香菇小片段GPD启动连接构建表达载体,三个重组质粒经过PCR鉴定,酶切鉴定,测序鉴定,分别命名为PGLES-VRS1、PGLES-VRS2,PGLES-VRS3；采用PEG介导法分别将表达载体PGLES-VRS1、PGLES-VRS2、PGLES-VRS3与辅助质粒PCE1001(含有TRP1基因)共转化进色氨酸营养缺陷型的灰盖鬼伞粉孢子的原生质体中.经过选择培养基筛选,PCR和RT-PCR分子鉴定,分别获得了3株、8株和4株转化子.

关 键 词： 白藜芦醇 基因克隆 载体构建 共转化 异源表达

分 类 号： [P7 S85]

领　　域： [天文地球] [农业科学] [农业科学]